Detecção Fenotípica e Taxa de Transporte Nasal de Staphylococcus aureus Resistente a Oxacilina Borde
Abstrato
Introdução: Investigamos a taxa de colonização nasal de Staphylococcus aureus heterogêneo (S. aureus resistente à meticilina (MRSA), S. aureus limítrofe resistente à oxacilina (BORSA), bem como padrões heterorresistentes exibidos por S.aureus, em 157 estudantes de medicina clínicos de Melaka Manipal Medical College, Universidade Manipal, a fim de determinar o perfil de suporte entre a comunidade estudantil da Malásia antes de entrarem as clínicas durante a fase de fase I II do seu programa médico na Índia.Métodos:Utilizou-se a técnica de agar de oxacilina para rastreio de MRSA. O método de macrodiluição em caldo foi utilizado para detectar valores mínimos de concentração inibitória (MIC) variando entre 0,25-16μg / ml. O caldo MHA incorporado com antibiótico oxacilina foi diluído de 0,25 μg / ml, 0,5 μg / ml, 1 μg / ml, 2 μg / ml, 4 μg / ml, 8 μg / ml a 16 μg / ml. O teste de difusão do disco de Cefoxitina foi realizado para verificar se os isolados de BORSA eram mecA negativos.Resultados:Das 37 amostras de Staphylococcus aureus coagulase positivas rastreadas, 27 (72,97%) amostras apresentaram uma faixa de CIM entre 0,25μg / ml-1,0μg / ml. Dez (27,02%) amostras apresentaram a faixa de MIC entre 2μg / ml e 8μg / ml; das quais 3 (8,10%) amostras apresentaram valor de CIM de 2μg / ml, e 3 (8,10%) amostras apresentaram CIM como 4μg / ml, enquanto 4 (10,81%) apresentaram CIM em 8μg / ml em diluições de caldo. Nenhum (0%) apresentou CIM por 16μg / ml, e os testes de difusão em disco com Cefoxitina mostraram que os 37 isolados de CoPS tinham zonas de inibição> 21mm de diâmetro.
ConclusõesEste estudo revelou a portadora nasal assintomática de BORSA (6,49%) e Staphylococcus aureus (MSSA) suscetível à meticilina positiva para coagulase (17,53%) em voluntários saudáveis. Dez (27,02%) amostras que apresentaram valores de CIM entre 2-8μg / ml apresentaram suscetibilidade à cefoxitina, comprovando a ausência do gene mecA; eles foram classificados como BORSA; enquanto 27 (72,97%) amostras que eram cepoxitina suscetíveis a cepas mecA negativas apresentaram valores de CIM que variaram entre 0,25 μg / ml a 1,0 μg / ml e foram classificadas como MSSA.
Palavras-chave
Heterorresistência, CoPS, BORSA, ORSA, MIC, MSSA, Macrododiluição em caldo, Colonização nasal
Como citar este artigo:
Santhosh DV, Shobha KL, Bairy eu, Gowrish R, D'Souza J. DETECÇÃO FENOTÍPICA E TAXA DE TRANSPORTES NASAIS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS RESISTENTE À OXACILINA HETERITÓPICA EM ESTUDANTES MÉDICOS PRÉ-CLÍNICOS DA MALÁSIA. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 agosto [citado: 2018 28 de agosto]; 2: 985-990. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=August&volume=2&issue=4&page=985-990&id=294
IntroduçãoOs desafios terapêuticos colocados por infecções clínicas causadas por cepas comunitárias adquiridas e nosocomiais de Staphylococcus aureus resistentes a oxacilina (ORSA) continuam a ser uma grande ameaça mundial (1) , (2) , (3) , (4) , (5 ). Os surtos recentes de síndromes infecciosas envolvendo cepas resistentes à oxacilina (ORSA) e cepas negativas resistentes à oxacilina da linha A de Staphylococcus aureus (BORSA) foram isoladas, com seus níveis de CIM variando de 1-4μg / ml. Possíveis fatores de risco para pacientes portadores de BORSA em um estudo de controle de caso por Balslev et. al mostrou que, em comparação com os controles, os pacientes infectados com BORSA eram mais propensos a infecções graves na pele, eram mais frequentemente hospitalizados e tinham mais leitos-dia (6) , (7) . A grande maioria dos ORSA e BORSA demonstrou produzir β-lactamases que hidrolisam muitas penicilinas e cefalosporinas de espectro estreito. (6) , (8) , (9) , (10) .
Inicialmente, os isolados de BORSA descritos foram cepas não-heterorresistentes de Staphylococcus aureus com CIM de oxacilina ≤ 2mg / L, e os isolados subseqüentes mostraram uma CIM de oxacilina mais alta variando entre 2-8mg / L. (11) , (12) . O mecanismo de resistência exibido pela BORSA inclui a produção excessiva de penicilinase, a meticilinase indutível mediada por plasmídeo, ou mutações pontuais de proteínas de ligação à penicilina (12) . As implicações clínicas da BORSA ainda são desconhecidas. A eficácia do tratamento ainda está em um estágio questionável, com uma CIM de oxacilina mais alta de 2-8mg / L. O tratamento com penicilinas resistentes à penicilinase (PRP) para BORSA com CIM ≤ 2mg / L é supostamente eficiente, enquanto altas doses de combinações de β-lactâmicos / inibidores de β-lactamase são tão eficazes quanto PRP em modelos animais(11) , (13) , (14) .
Nosso estudo inicial foi feito para determinar portadores nasais de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) das narinas anteriores de estudantes de medicina pré-clínicos vindos da Malásia; para ver se havia alguma carruagem nasal na comunidade estudantil antes de serem expostos aos cenários clínicos em suas publicações acadêmicas. As amostras nasais não produziram MRSA. O estudo nos levou ainda a determinar o Satphylococcus aureus resistente a oxacilina, de baixo e alto índice, mostrando padrões heterorresistentes.
Material e métodos
Desenho do estudo e amostragemEste estudo foi aprovado pelo comitê institucional de ética em hospital Kasturba (KHEC) do Kasturba Medical College, Manipal, Índia, para a coleta de amostras da comunidade estudantil, que incluiu 65 homens e 92 mulheres. Este estudo foi um estudo de coorte, projetado para analisar a taxa de portadores de Staphylococcus aureus resistentes à oxacilina em 157 estudantes pré-clínicos da Malásia que estudam no Melaka Manipal Medical College, Manipal University, Manipal, Índia, e cujas idades foram entre 18 e 22 anos . De um total de aproximadamente 350 alunos, 157 deles se voluntariaram para participar deste estudo, e as amostras foram obtidas após o consentimento por escrito da população em estudo. Das 37 amostras de Staphylococcus aureus Coagulase positive (CoPS),
Coleta de Amostras
Para os isolamentos, foram coletadas amostras das narinas anteriores de estudantes voluntários usando cotonetes estéreis embebidos em solução salina estéril, e as amostras foram diretamente inoculadas em ágar sangue de carneiro (FI-Chemechtron, Pvt. Ltd., Bangalore, Índia).
Processamento de espécimes As
placas de ágar de sangue de carneiro inoculadas foram mantidas por 24 horas de incubação a 37oC. Colônias convexas amarelo-douradas a brancas, opacas, arredondadas foram isoladas para posterior análise bioquímica. Cepas que foram catalase positivas e aquelas que fermentaram manitol foram identificadas como espécies de Staphylococcus.
Teste da coagulase de deslizamento e coagulase tubular: (7) Estes testes foram realizados para isolar o Staphylococcus aureus coagulase positivo.
Teste de DNase: (22)A actividade de ADNase foi testada utilizando agar de ADNase com azul de toluidina (M1041, HIMEDIA Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India). O meio foi preparado de acordo com as instruções do fabricante. A limpeza rosada ao redor das colônias no meio de teste da DNase confirmou a atividade da DNase.
O rastreio de agar de oxacilina com 4% de NaCl a uma concentrao de 6 / mL foi realizado para pesquisar MRSA.
Detec�o fenot�ica da macrodilui�o de Caldo BORSA: Foram realizadas
concentra�es decrescentes de 500 mg de cloxacilina (Biochem Pharmaceutical Industries Pvt. Ltd., Bombaim, India) em dilui�es duplas em s�ie, variando entre 0,25 e 16 pg / mL. (15)O antibiótico foi dissolvido e preparado de acordo com as instruções do fabricante e foi diluído em caldo Mueller-Hinton, MHB (M391, HIMEDIA Laboratories Pvt. Ltd., Bombaim, Índia) (16).com NaCl a 2% (Universal Laboratories Pvt. Ltd., Bombaim, Índia) de acordo com os padrões NCCLS (anteriormente chamado de Comitê Nacional de Padrões de Laboratório Clínico, agora Instituto de Padrões Laboratoriais Clínicos CLSI). As amostras de Staphylococcus aureus coagulase positivas que foram isoladas, foram subcultivadas em agar de sangue de ovelha (FI-Chemechtron, Pvt. Ltd., Bangalore, Índia) e incubadas durante a noite durante 24 horas a 37 ° C. CoPS foram padronizados para 0,5 × McFarland. O controle positivo foi um tubo com MHB, sem antibiótico, enquanto o controle negativo foi um tubo não inoculado. Os tubos foram incubados por 48 horas a 37oC. A menor concentração de cloxacilina que inibiu o crescimento bacteriano visualizado pela falta de turbidez visual foi designada como concentração inibitória mínima (CIM).
Método de Difusão de Disco de Cefoxitina
(18) Placas Mueller-Hinton (MHA) foram inoculadas com suspensão padrão de 0,5 × McFarland das 37 amostras que mostraram resistência heterotípica à oxacilina com MIC variando de 2-16μg / ml, passando sobre a superfície do ágar. discos de cefoxitina de 30μg (CT01198, Oxoid Ltd., Hampshire, Inglaterra) foram colocados na superfície da MHA e incubados por 24 horas a 37oC. cepoxitina suscetível ou mecA negativo Staphylococcus aureus cepa ATCC 29213 foi usado como cepa de controle de qualidade. O diâmetro da zona de inibição da cefoxitina> 21 mm foi registado para todas as estirpes de teste. (19)
Análise estatística: O teste do qui-quadrado foi aplicado para verificar se a distribuição era a mesma entre MRSA, BORSA e MSSA.
Resultados
Das 37 amostras de Staphylococcus aureus coagulase positivas rastreadas, 27 (72,97%) amostras apresentaram uma faixa de CIM entre 0,25μg / ml-1,0μg / ml, 10 (27,02%) amostras apresentaram uma faixa de CIM entre 2μg / ml-8μg / ml ; das quais 3 (8,10%) amostras apresentaram um valor de CIM de 2μg / ml, 3 (8,10%) amostras apresentaram CIM como 4μg / ml, enquanto 4 (10,81%) apresentaram uma CIM de 8μg / ml em diluições de caldo. Nenhum (0%) apresentou CIM por 16μg / ml, e os testes de difusão em disco com cefoxitina realizados, mostraram que os 37 isolados de CoPS tinham zonas de inibição> 21mm de diâmetro[Tabela / Fig. 1].
Todas as amostras de CoPS foram suscetíveis à oxacilina em tela de ágar na concentração de 6μg / ml, enquanto na macrodiluição em caldo, padrões de resistência heterotípica à oxacilina com CIM variando entre 0,25% a 1,0% e CIMs entre 2-8μg / ml foram isolados. (17) Dez dos Staphylococcus coagulase positivos que apresentaram resistência heterotípica à oxacilina com CIMs entre 2-8μg / ml, foram classificados como Staphylococcus aureus resistentes à oxacilina (BORSA), e o teste de difusão do disco com cefoxitina conduzido para essas 10 amostras confirmou a ausência da O gene mecA, como suas zonas de inibição foram todos maiores do que 21mm de diâmetro, e caracteristicamente essas 10 amostras também não mostraram crescimento no teste de oxacillin agar screen.
Discussão
Este estudo mostra que, de um grupo de 157 estudantes malaios pré-clínicos, 10 deles eram portadores nasais saudáveis de BORSA. Um estudo retrospectivo de suas histórias clínicas não revelou hospitalizações ou infecções graves. Eles não apresentaram nenhum sintoma de infecções por BORSA, embora as implicações clínicas da BORSA em portadores não sintomáticos ainda sejam debatidas. A taxa de colonização nasal de BORSA em uma população estudantil malaia jovem, revelou ser tão baixa quanto 6,36%, enquanto a porcentagem de carga nasal de cepas sensíveis à meticilina positivas para coagulase foi de 17,19%. Nenhum tinha histórico de problemas dermatológicos; mostrando que eles eram assintomáticos.Os testes fenotípicos que foram feitos para a detecção de MRSA e a subseqüente avaliação através dos resultados da difusão em disco da cefoxitina estavam de acordo com o protocolo padrão, provando que não havia portadores nasais para portadores de MRSA positivos para mecA e que a detecção fenotípica de BORSA através de macrodiluição de caldo para MICs entre 2-8μg / ml também foi encontrado para estar de acordo com o teste de difusão de disco de cefoxitina que mostrou zonas de inibição com diâmetros medindo mais de 21mm. Estudos comprovaram que a eficácia da cefoxitina é muito superior à da oxacilina na sensibilidade e especificidade (20). As cepas de BORSA não são bem detectadas pela técnica de ágar-ágar oxacilina. Em nosso estudo para o isolamento e detecção de MRSA em técnica de ágar-ágar oxacilina; As linhagens de BORSA não apareceram, mas foram detectadas pela técnica de macrodiluição em caldo.
As cepas de BORSA não possuem a presença de PBP2a, e diz-se que possuem PBPs normais em contraste com as cepas de ORSA. (21) Acredita-se que o baixo nível de resistência à oxacilina nessas cepas seja devido à sua hiperprodução de β-lactamases extracelulares (22) , mas de acordo com Tomasz et al. (23), as PBPs de certas estirpes de BORSA podem mostrar afinidades moderadas à meticilina e tais estirpes foram denominadas MODSA (PBPs modificadas) de modo a distingui-las das estirpes de BORSA normais contendo PBP.
Embora BORSA não mostre nem mesmo um único traço de diferenciação para distingui-lo do MSSA ou MRSA; (24)demonstraram estar relacionados devido à presença de 94/96 tipos de fagos, alto grau de parentesco genético e um plasmídeo de 17,2kb que torna sua capacidade de hiperproduzir β-lactamases. Esta característica é considerada a única característica que denota o fenótipo BORSA (25) , (26)além da produção de uma meticilinase. Alguns autores afirmam que as substituições de aminoácidos para uma mutação pontual no PBP2 é o fator que contribui para o fenótipo BORSA (27) .
Vários BORSA isolados, eram de condições dermatológicas de estudos anteriores; mas nosso estudo revelou que a presença de cepas resistentes à oxacilina heterotípicas de BORSA pode ser encontrada como colonizadores nasais sem quaisquer sintomas predisponentes ou condições clínicas. Os testes empregados como tela de ágar para resistência à oxacilina não permitiram o crescimento das 10 cepas de BORSA, e estes só puderam ser detectados através de valores de CIM correlacionados com as suscetibilidades do disco de cefoxitina, indicando que isso poderia ser usado na detecção laboratorial de rotina para estas cepas. ajuda a evitar o relato de padrões falsos de susceptibilidade à oxacilina devido à resistência heterogênea demonstrada pelos estafilococos. Esses métodos fenotípicos podem ser empregados em laboratórios que não possuem instalações para técnicas de detecção genotípica.
Reservatórios saudáveis na comunidade são uma fonte potencial de infecção. Deve ser obrigatório fazer a triagem para o transporte nasal de cepas resistentes heterotípicas de Staphylococcus aureus, especialmente em estudantes de medicina pré-clínicos vindos de outros países que poderiam se tornar portadores saudáveis na comunidade, e poderiam representar um risco na transmissão das cepas resistentes ao hospitais onde serão expostos durante sua fase clínica de seu grau médico. Isso poderia ajudar a verificar a disseminação de infecções adquiridas na comunidade e adquiridas em hospitais através de reservatórios na comunidade. A triagem e a pesquisa de estudantes antes de sua entrada no ambiente hospitalar ajudarão na restrição da rápida disseminação de cepas heteroresistentes de estafilococos,
Mensagem chave
Resistência antimicrobiana, estudo pré-clínico, pesquisa, carro nasal assintomáticoReconhecimento
O projeto foi financiado pela Manipal University, que concedeu fundos diretamente ao departamento de Microbiologia para a realização do estudo. Agradecemos ao Reitor da Faculdade de Medicina de Melaka Manipal por seu incentivo e facilidades para realizar o projeto. Agradecemos também aos estudantes voluntários que participaram do estudo. Agradecemos ao Sr. Anand K. por sua contribuição ao estudo.
Introdução: Investigamos a taxa de colonização nasal de Staphylococcus aureus heterogêneo (S. aureus resistente à meticilina (MRSA), S. aureus limítrofe resistente à oxacilina (BORSA), bem como padrões heterorresistentes exibidos por S.aureus, em 157 estudantes de medicina clínicos de Melaka Manipal Medical College, Universidade Manipal, a fim de determinar o perfil de suporte entre a comunidade estudantil da Malásia antes de entrarem as clínicas durante a fase de fase I II do seu programa médico na Índia.Métodos:Utilizou-se a técnica de agar de oxacilina para rastreio de MRSA. O método de macrodiluição em caldo foi utilizado para detectar valores mínimos de concentração inibitória (MIC) variando entre 0,25-16μg / ml. O caldo MHA incorporado com antibiótico oxacilina foi diluído de 0,25 μg / ml, 0,5 μg / ml, 1 μg / ml, 2 μg / ml, 4 μg / ml, 8 μg / ml a 16 μg / ml. O teste de difusão do disco de Cefoxitina foi realizado para verificar se os isolados de BORSA eram mecA negativos.Resultados:Das 37 amostras de Staphylococcus aureus coagulase positivas rastreadas, 27 (72,97%) amostras apresentaram uma faixa de CIM entre 0,25μg / ml-1,0μg / ml. Dez (27,02%) amostras apresentaram a faixa de MIC entre 2μg / ml e 8μg / ml; das quais 3 (8,10%) amostras apresentaram valor de CIM de 2μg / ml, e 3 (8,10%) amostras apresentaram CIM como 4μg / ml, enquanto 4 (10,81%) apresentaram CIM em 8μg / ml em diluições de caldo. Nenhum (0%) apresentou CIM por 16μg / ml, e os testes de difusão em disco com Cefoxitina mostraram que os 37 isolados de CoPS tinham zonas de inibição> 21mm de diâmetro.ConclusõesEste estudo revelou a portadora nasal assintomática de BORSA (6,49%) e Staphylococcus aureus (MSSA) suscetível à meticilina positiva para coagulase (17,53%) em voluntários saudáveis. Dez (27,02%) amostras que apresentaram valores de CIM entre 2-8μg / ml apresentaram suscetibilidade à cefoxitina, comprovando a ausência do gene mecA; eles foram classificados como BORSA; enquanto 27 (72,97%) amostras que eram cepoxitina suscetíveis a cepas mecA negativas apresentaram valores de CIM que variaram entre 0,25 μg / ml a 1,0 μg / ml e foram classificadas como MSSA.
Palavras-chave
Heterorresistência, CoPS, BORSA, ORSA, MIC, MSSA, Macrododiluição em caldo, Colonização nasal
Como citar este artigo:
Santhosh DV, Shobha KL, Bairy eu, Gowrish R, D'Souza J. DETECÇÃO FENOTÍPICA E TAXA DE TRANSPORTES NASAIS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS RESISTENTE À OXACILINA HETERITÓPICA EM ESTUDANTES MÉDICOS PRÉ-CLÍNICOS DA MALÁSIA. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 agosto [citado: 2018 28 de agosto]; 2: 985-990. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=August&volume=2&issue=4&page=985-990&id=294
IntroduçãoOs desafios terapêuticos colocados por infecções clínicas causadas por cepas comunitárias adquiridas e nosocomiais de Staphylococcus aureus resistentes a oxacilina (ORSA) continuam a ser uma grande ameaça mundial (1) , (2) , (3) , (4) , (5 ). Os surtos recentes de síndromes infecciosas envolvendo cepas resistentes à oxacilina (ORSA) e cepas negativas resistentes à oxacilina da linha A de Staphylococcus aureus (BORSA) foram isoladas, com seus níveis de CIM variando de 1-4μg / ml. Possíveis fatores de risco para pacientes portadores de BORSA em um estudo de controle de caso por Balslev et. al mostrou que, em comparação com os controles, os pacientes infectados com BORSA eram mais propensos a infecções graves na pele, eram mais frequentemente hospitalizados e tinham mais leitos-dia (6) , (7) . A grande maioria dos ORSA e BORSA demonstrou produzir β-lactamases que hidrolisam muitas penicilinas e cefalosporinas de espectro estreito. (6) , (8) , (9) , (10) .Inicialmente, os isolados de BORSA descritos foram cepas não-heterorresistentes de Staphylococcus aureus com CIM de oxacilina ≤ 2mg / L, e os isolados subseqüentes mostraram uma CIM de oxacilina mais alta variando entre 2-8mg / L. (11) , (12) . O mecanismo de resistência exibido pela BORSA inclui a produção excessiva de penicilinase, a meticilinase indutível mediada por plasmídeo, ou mutações pontuais de proteínas de ligação à penicilina (12) . As implicações clínicas da BORSA ainda são desconhecidas. A eficácia do tratamento ainda está em um estágio questionável, com uma CIM de oxacilina mais alta de 2-8mg / L. O tratamento com penicilinas resistentes à penicilinase (PRP) para BORSA com CIM ≤ 2mg / L é supostamente eficiente, enquanto altas doses de combinações de β-lactâmicos / inibidores de β-lactamase são tão eficazes quanto PRP em modelos animais(11) , (13) , (14) .
Nosso estudo inicial foi feito para determinar portadores nasais de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) das narinas anteriores de estudantes de medicina pré-clínicos vindos da Malásia; para ver se havia alguma carruagem nasal na comunidade estudantil antes de serem expostos aos cenários clínicos em suas publicações acadêmicas. As amostras nasais não produziram MRSA. O estudo nos levou ainda a determinar o Satphylococcus aureus resistente a oxacilina, de baixo e alto índice, mostrando padrões heterorresistentes.
Material e métodos
Desenho do estudo e amostragemEste estudo foi aprovado pelo comitê institucional de ética em hospital Kasturba (KHEC) do Kasturba Medical College, Manipal, Índia, para a coleta de amostras da comunidade estudantil, que incluiu 65 homens e 92 mulheres. Este estudo foi um estudo de coorte, projetado para analisar a taxa de portadores de Staphylococcus aureus resistentes à oxacilina em 157 estudantes pré-clínicos da Malásia que estudam no Melaka Manipal Medical College, Manipal University, Manipal, Índia, e cujas idades foram entre 18 e 22 anos . De um total de aproximadamente 350 alunos, 157 deles se voluntariaram para participar deste estudo, e as amostras foram obtidas após o consentimento por escrito da população em estudo. Das 37 amostras de Staphylococcus aureus Coagulase positive (CoPS),Coleta de Amostras
Para os isolamentos, foram coletadas amostras das narinas anteriores de estudantes voluntários usando cotonetes estéreis embebidos em solução salina estéril, e as amostras foram diretamente inoculadas em ágar sangue de carneiro (FI-Chemechtron, Pvt. Ltd., Bangalore, Índia).
Processamento de espécimes As
placas de ágar de sangue de carneiro inoculadas foram mantidas por 24 horas de incubação a 37oC. Colônias convexas amarelo-douradas a brancas, opacas, arredondadas foram isoladas para posterior análise bioquímica. Cepas que foram catalase positivas e aquelas que fermentaram manitol foram identificadas como espécies de Staphylococcus.
Teste da coagulase de deslizamento e coagulase tubular: (7) Estes testes foram realizados para isolar o Staphylococcus aureus coagulase positivo.
Teste de DNase: (22)A actividade de ADNase foi testada utilizando agar de ADNase com azul de toluidina (M1041, HIMEDIA Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India). O meio foi preparado de acordo com as instruções do fabricante. A limpeza rosada ao redor das colônias no meio de teste da DNase confirmou a atividade da DNase.
O rastreio de agar de oxacilina com 4% de NaCl a uma concentrao de 6 / mL foi realizado para pesquisar MRSA.
Detec�o fenot�ica da macrodilui�o de Caldo BORSA: Foram realizadas
concentra�es decrescentes de 500 mg de cloxacilina (Biochem Pharmaceutical Industries Pvt. Ltd., Bombaim, India) em dilui�es duplas em s�ie, variando entre 0,25 e 16 pg / mL. (15)O antibiótico foi dissolvido e preparado de acordo com as instruções do fabricante e foi diluído em caldo Mueller-Hinton, MHB (M391, HIMEDIA Laboratories Pvt. Ltd., Bombaim, Índia) (16).com NaCl a 2% (Universal Laboratories Pvt. Ltd., Bombaim, Índia) de acordo com os padrões NCCLS (anteriormente chamado de Comitê Nacional de Padrões de Laboratório Clínico, agora Instituto de Padrões Laboratoriais Clínicos CLSI). As amostras de Staphylococcus aureus coagulase positivas que foram isoladas, foram subcultivadas em agar de sangue de ovelha (FI-Chemechtron, Pvt. Ltd., Bangalore, Índia) e incubadas durante a noite durante 24 horas a 37 ° C. CoPS foram padronizados para 0,5 × McFarland. O controle positivo foi um tubo com MHB, sem antibiótico, enquanto o controle negativo foi um tubo não inoculado. Os tubos foram incubados por 48 horas a 37oC. A menor concentração de cloxacilina que inibiu o crescimento bacteriano visualizado pela falta de turbidez visual foi designada como concentração inibitória mínima (CIM).
Método de Difusão de Disco de Cefoxitina
(18) Placas Mueller-Hinton (MHA) foram inoculadas com suspensão padrão de 0,5 × McFarland das 37 amostras que mostraram resistência heterotípica à oxacilina com MIC variando de 2-16μg / ml, passando sobre a superfície do ágar. discos de cefoxitina de 30μg (CT01198, Oxoid Ltd., Hampshire, Inglaterra) foram colocados na superfície da MHA e incubados por 24 horas a 37oC. cepoxitina suscetível ou mecA negativo Staphylococcus aureus cepa ATCC 29213 foi usado como cepa de controle de qualidade. O diâmetro da zona de inibição da cefoxitina> 21 mm foi registado para todas as estirpes de teste. (19)
Análise estatística: O teste do qui-quadrado foi aplicado para verificar se a distribuição era a mesma entre MRSA, BORSA e MSSA.
Resultados
Das 37 amostras de Staphylococcus aureus coagulase positivas rastreadas, 27 (72,97%) amostras apresentaram uma faixa de CIM entre 0,25μg / ml-1,0μg / ml, 10 (27,02%) amostras apresentaram uma faixa de CIM entre 2μg / ml-8μg / ml ; das quais 3 (8,10%) amostras apresentaram um valor de CIM de 2μg / ml, 3 (8,10%) amostras apresentaram CIM como 4μg / ml, enquanto 4 (10,81%) apresentaram uma CIM de 8μg / ml em diluições de caldo. Nenhum (0%) apresentou CIM por 16μg / ml, e os testes de difusão em disco com cefoxitina realizados, mostraram que os 37 isolados de CoPS tinham zonas de inibição> 21mm de diâmetro[Tabela / Fig. 1].Todas as amostras de CoPS foram suscetíveis à oxacilina em tela de ágar na concentração de 6μg / ml, enquanto na macrodiluição em caldo, padrões de resistência heterotípica à oxacilina com CIM variando entre 0,25% a 1,0% e CIMs entre 2-8μg / ml foram isolados. (17) Dez dos Staphylococcus coagulase positivos que apresentaram resistência heterotípica à oxacilina com CIMs entre 2-8μg / ml, foram classificados como Staphylococcus aureus resistentes à oxacilina (BORSA), e o teste de difusão do disco com cefoxitina conduzido para essas 10 amostras confirmou a ausência da O gene mecA, como suas zonas de inibição foram todos maiores do que 21mm de diâmetro, e caracteristicamente essas 10 amostras também não mostraram crescimento no teste de oxacillin agar screen.
Discussão
Este estudo mostra que, de um grupo de 157 estudantes malaios pré-clínicos, 10 deles eram portadores nasais saudáveis de BORSA. Um estudo retrospectivo de suas histórias clínicas não revelou hospitalizações ou infecções graves. Eles não apresentaram nenhum sintoma de infecções por BORSA, embora as implicações clínicas da BORSA em portadores não sintomáticos ainda sejam debatidas. A taxa de colonização nasal de BORSA em uma população estudantil malaia jovem, revelou ser tão baixa quanto 6,36%, enquanto a porcentagem de carga nasal de cepas sensíveis à meticilina positivas para coagulase foi de 17,19%. Nenhum tinha histórico de problemas dermatológicos; mostrando que eles eram assintomáticos.Os testes fenotípicos que foram feitos para a detecção de MRSA e a subseqüente avaliação através dos resultados da difusão em disco da cefoxitina estavam de acordo com o protocolo padrão, provando que não havia portadores nasais para portadores de MRSA positivos para mecA e que a detecção fenotípica de BORSA através de macrodiluição de caldo para MICs entre 2-8μg / ml também foi encontrado para estar de acordo com o teste de difusão de disco de cefoxitina que mostrou zonas de inibição com diâmetros medindo mais de 21mm. Estudos comprovaram que a eficácia da cefoxitina é muito superior à da oxacilina na sensibilidade e especificidade (20). As cepas de BORSA não são bem detectadas pela técnica de ágar-ágar oxacilina. Em nosso estudo para o isolamento e detecção de MRSA em técnica de ágar-ágar oxacilina; As linhagens de BORSA não apareceram, mas foram detectadas pela técnica de macrodiluição em caldo.As cepas de BORSA não possuem a presença de PBP2a, e diz-se que possuem PBPs normais em contraste com as cepas de ORSA. (21) Acredita-se que o baixo nível de resistência à oxacilina nessas cepas seja devido à sua hiperprodução de β-lactamases extracelulares (22) , mas de acordo com Tomasz et al. (23), as PBPs de certas estirpes de BORSA podem mostrar afinidades moderadas à meticilina e tais estirpes foram denominadas MODSA (PBPs modificadas) de modo a distingui-las das estirpes de BORSA normais contendo PBP.
Embora BORSA não mostre nem mesmo um único traço de diferenciação para distingui-lo do MSSA ou MRSA; (24)demonstraram estar relacionados devido à presença de 94/96 tipos de fagos, alto grau de parentesco genético e um plasmídeo de 17,2kb que torna sua capacidade de hiperproduzir β-lactamases. Esta característica é considerada a única característica que denota o fenótipo BORSA (25) , (26)além da produção de uma meticilinase. Alguns autores afirmam que as substituições de aminoácidos para uma mutação pontual no PBP2 é o fator que contribui para o fenótipo BORSA (27) .
Vários BORSA isolados, eram de condições dermatológicas de estudos anteriores; mas nosso estudo revelou que a presença de cepas resistentes à oxacilina heterotípicas de BORSA pode ser encontrada como colonizadores nasais sem quaisquer sintomas predisponentes ou condições clínicas. Os testes empregados como tela de ágar para resistência à oxacilina não permitiram o crescimento das 10 cepas de BORSA, e estes só puderam ser detectados através de valores de CIM correlacionados com as suscetibilidades do disco de cefoxitina, indicando que isso poderia ser usado na detecção laboratorial de rotina para estas cepas. ajuda a evitar o relato de padrões falsos de susceptibilidade à oxacilina devido à resistência heterogênea demonstrada pelos estafilococos. Esses métodos fenotípicos podem ser empregados em laboratórios que não possuem instalações para técnicas de detecção genotípica.
Reservatórios saudáveis na comunidade são uma fonte potencial de infecção. Deve ser obrigatório fazer a triagem para o transporte nasal de cepas resistentes heterotípicas de Staphylococcus aureus, especialmente em estudantes de medicina pré-clínicos vindos de outros países que poderiam se tornar portadores saudáveis na comunidade, e poderiam representar um risco na transmissão das cepas resistentes ao hospitais onde serão expostos durante sua fase clínica de seu grau médico. Isso poderia ajudar a verificar a disseminação de infecções adquiridas na comunidade e adquiridas em hospitais através de reservatórios na comunidade. A triagem e a pesquisa de estudantes antes de sua entrada no ambiente hospitalar ajudarão na restrição da rápida disseminação de cepas heteroresistentes de estafilococos,
Mensagem chave
Resistência antimicrobiana, estudo pré-clínico, pesquisa, carro nasal assintomáticoReconhecimentoO projeto foi financiado pela Manipal University, que concedeu fundos diretamente ao departamento de Microbiologia para a realização do estudo. Agradecemos ao Reitor da Faculdade de Medicina de Melaka Manipal por seu incentivo e facilidades para realizar o projeto. Agradecemos também aos estudantes voluntários que participaram do estudo. Agradecemos ao Sr. Anand K. por sua contribuição ao estudo.