Lipase E Ca2 + Ions Como Biomarcadores No Soro De Sangue De NIDDM
Diabetes Mellitus Não Dependente de Insulina (NIDDM) é uma doença metabólica caracterizada por resistência à insulina, hiperglicemia, freqüentemente associada com hipertensão, distúrbios lipídicos e obesidade. Soro sanguíneo de indivíduos saudáveis normais e pacientes com DMNID são considerados para estudo. As concentrações de lipase e íons de Ca2 + foram comparadas em indivíduos com DMNID e indivíduos saudáveis normais, juntamente com a concentração de glicose. A atividade da lipase está aumentada (287-325 U / L) no soro sanguíneo de NIDDM do que na faixa saudável normal (30-250 U / L). A concentração de íons Ca2 + diminuiu (1,5-3,4 mg / dL) abaixo da faixa normal (8,9-10,4 mg / dL). Assim, a lipase pode ser usada como um biomarcador para o diagnóstico de doenças e as baixas concentrações de Ca2 + observadas na NIDDM podem ser alarmantes, levando a múltiplas doenças.
Palavras-chave
Íons Ca2 +, glicose, insulina, lipase e Diabetes Mellitus Não Insulin-Dependente.
Como citar este artigo:
VERMA N, MITTAL M, VERMA R K. LIPASE E IÕES CA2 + COMO BIOMARCADORES EM SORO DE SANGUE DE NIDDM. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 agosto [citado: 2018 28 de agosto]; 2: 942-945. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=August&volume=2&issue=4&page=942-945&id=287
IntroduçãoO Diabetes Mellitus Não Dependente de Insulina (NIDDM) tornou-se um grande problema de saúde em todo o mundo. Atualmente, existem cerca de 125 milhões de pessoas afetadas por esta doença, globalmente. Mais de 90% dos casos de diabetes em todo o mundo estão na forma conhecida como NIDDM. A resistência à insulina é um marcador biológico proeminente da NIDDM, particularmente quando está associada à obesidade, e é definida como uma resposta biológica prejudicada à insulina exógena ou endógena. Esta resposta não está estritamente confinada à relação entre insulina e glicose, mas se estende a outras ações desse hormônio, incluindo seu efeito no metabolismo de lipídios e proteínas, função do endotélio vascular e expressão gênica.(7) . Como mais uma prova da importância da distribuição de gordura como determinante da resistência à insulina pelos lutadores de sumô(8) , os lipídios desempenham um papel complexo na homeostase da glicose em condições normais e patológicas.(2) . As lipases estão envolvidas na secreção de insulina, e a inibição farmacológica da atividade da lipase nas células ß prejudica a secreção de insulina(9) . Os íons Ca2 + são únicos entre todas as espécies de íons minerais devido ao seu grande gradiente extra intra. Os íons de Ca2 + livre intracelular são os determinantes na regulação da função cardíaca e da contração da musculatura lisa, e atuam como um fator comum final na resposta celular a vários estímulos.(1) . Até o momento, não houve estudos sobre lipase e íons Ca2 + como biomarcadores no soro sanguíneo da NIDDM. Por essa razão, estudamos agora as concentrações de lipase e íons de Ca2 + em indivíduos saudáveis normais e pacientes com DMNID.
Material e métodos
Seleco de amostras Asamostras foram divididas em dois grupos - indivuos normais saudeis e indivuos NIDDM. O soro sanguíneo de cada grupo, com idade entre 35 e 45 anos, foi coletado do laboratório clínico Patiala. Cada grupo era composto por oito sujeitos que pertenciam aos sexos masculino e feminino. As amostras foram seleccionadas com base na idade, uma vez que a NIDDM se manifesta ap os 40 anos de idade.
Produtos
quicos A enzima lipase foi adquirida a Hi media Laboratory Pvt. Ltd., Mumbai. Todos os outros produtos químicos e solventes do mais alto grau foram adquiridos da Loba Chemie. Pvt. Ltd., Sd bem, Mumbai.
Equipamento utilizado
Systronics UV-VIS Spectrophotometer119, Systronics Photoflourometer151 de Naroda, Ahmedabad, na Índia.
Estimativa de glicose
Os níveis de glicose foram estimados em indivíduos normais saudáveis e indivíduos com DMNID por estimativa de cobre não reduzido(11) .
Actividade lip�ica A actividade
lip�ica foi determinada em indiv�uos normais saud�eis e indiv�uos com DMNID atrav� da medi�o da forma�o de p-nitrofenol a partir de palmitato de p-nitrofenol(10) . A SDS-PAGE de pacientes normais diluídos de 20X e pacientes com DMNID foi realizada ajustando-a em um ponto isoelétrico pH = 4,65 de lipase(6)
Detecção de iões Ca2 + A
concentração de iões Ca2 + no soro sanguíneo de indivíduos saudáveis normais e indivíduos NIDDM foi determinada desenvolvendo a formação de um quelato fluorescente entre iões Ca2 + e calceína numa solução alcalina. Intensidade de fluorescência medida a 540 nm com excitação a 330 nm ou 480 nm(12) .
Análise Estatística Os
resultados são relatados em triplicado como média, que é um valor único selecionado de um grupo de valores para representar de alguma forma - um valor que deve representar todo o grupo do qual faz parte, como típico de todos os valores em o grupo.
Resultados
A atividade de glicose e lipase e concentração de íons Ca2 + são relatados em (Tabela / Fig 1) ,(Tabela / Fig 2) ,(Tabela / Fig 3) respectivamente.A atividade lipídica também foi confirmada por SDS - PAGE de 20X diluído normal individual e NIDDM sérico, ajustando - o em um ponto isoelétrico pH = 4,65 de lipase.(6) . A banda de lipase encontrada na posição 57 kDa(4) foi intenso em NIDDM do que em indivuos saudeis normais, como mostrado na [Tabela / Fig 1].
Discussão
A insulina estimula a lipogênese e diminui a lipólise. O metabolismo celular do combustível eleva a razão ATP / ADP, resultando no fechamento dos canais KATP e na despolarização da célula β concomitante. Essa despolarização, por sua vez, ativa canais de Ca2 + dependentes de voltagem, resultando em influxo de Ca2 + e exocitose dependente de Ca2 +5. Portanto, com base nisso, lipase e Ca2 + são selecionados como biomarcadores. A actividade da lipase na DMNID é mais elevada do que em indivíduos saudáveis normais, enquanto a concentração de iões Ca2 + é baixa em NIDDM do que em indivíduos saudáveis normais. As lipases estão envolvidas na secreção de insulina e a inibição farmacológica da atividade da lipase nas células β prejudica a secreção de insulina(9) . Os íons Ca2 + podem dar origem a um não. de doenças que são comuns na velhice, como hipertensão, arteriosclerose, doenças neurodegenerativas, malignidade e doença articular degenerativa(3).Conclusão
A concentração de íons Ca2 + diminuiu (1,5-3,4 mg / dL) abaixo da faixa normal (8,9-10,4 mg / dL). A banda de lipase encontrada na posição 57 kDa(4) foi intensa em indivíduos com DMNID do que em indivíduos saudáveis normais. Este estudo mostra que os íons lipase e Ca2 + são biomarcadores muito importantes, pois podem ser usados para o diagnóstico de doenças. As lipases estão envolvidas na secreção de insulina e a inibição farmacológica da atividade da lipase nas células β prejudica a secreção de insulina. Uma baixa concentração de íons Ca2 + observada na NIDDM pode ser considerada alarmante, levando a múltiplas doenças. Mais estudos são necessários para estabelecer isso.
Reconhecimento
A ajuda financeira para a compra dos instrumentos do Departamento de Biotecnologia, Universidade de Punjabi, Patiala, Punjab, pelo AICTE, é totalmente reconhecidaReferências1.Barbagallo M, Resnick LM, LJ Dominguez, Licata G. Diabetes, hipertensão e envelhecimento: A hipótese iônica do envelhecimento e doenças metabólicas cardiovasculares. Metabolismo do Diabetes 1997; 23: 281-94.2.Fex M, Lucas S, MS Winzell, Ahren B, Holm C, lipases de células ß Mulder H. e secreção de insulina. Diabetes 2006; 55 (Suppl.2): S24-S31.3.Paradoxo de Fujita T. Calcium: Conseqüências da deficiência de cálcio manifestada pela variedade de doenças. Jornal de Metabolismo Ósseo e Mineral 2000; 18: 234-36.4.Hayashi R, Tajima S, Yamamoto A. Purificação e caracterização da lipoproteína lipase do plasma humano pós-heparina e sua comparação com a lipase lipoproteica do leite bovino purificado. Journal of Biochemistry 1986; 100: 319-31.5.Khan AF, Goforth BP, Zhang M e Satin SL A insulina ativa os canais de K + sensíveis a ATP nas células β pancreáticas através da via dependente de fosfatidilinositol 3-quinase. Diabetes. 2001; 50: 2192-98.6.Laemmli Clivagem de proteínas estruturais durante a montagem da cabeça do bacteriófago T4. Nature 1970; 227: 680-85.7.Ludvik B, Nolan JJ, Baloga J, Sacks D, Olefsky J. Efeito da obesidade na resistência à insulina em indivíduos normais e pacientes com NIDDM. Diabetes 1995; 44: 1121-25.8.Matsuzawa Y. Fisiopatologia e mecanismos moleculares da síndrome da gordura visceral. Revisão de Metabolismo do Diabetes 1997; 13: 3-13.9.Mulder H, Yang S, MS Winzell, Holm C, Ahren B. Inibição da atividade da lipase e lipólise em ilhotas de ratos reduz a secreção de insulina. Diabetes 2004; 53: 122–28.10.Sacks, DB Carbohydrates In: Buritis, CA e Ashwood ER (ed) Teitzs livro de química clínica, 4th edn. Saunders, Filadélfia, 2005.11.Shafter e Hartmann Determinação de glicose pela estimativa de cobre não reduzido. Journal of Biological Chemistry 1920-1921; 45: 365.12.Vogel AI. Livro de texto de análise quantitativa inorgânica. 4th edn. Longman, Newyork, 1969.
Palavras-chave
Íons Ca2 +, glicose, insulina, lipase e Diabetes Mellitus Não Insulin-Dependente.
Como citar este artigo:
VERMA N, MITTAL M, VERMA R K. LIPASE E IÕES CA2 + COMO BIOMARCADORES EM SORO DE SANGUE DE NIDDM. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 agosto [citado: 2018 28 de agosto]; 2: 942-945. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=August&volume=2&issue=4&page=942-945&id=287
IntroduçãoO Diabetes Mellitus Não Dependente de Insulina (NIDDM) tornou-se um grande problema de saúde em todo o mundo. Atualmente, existem cerca de 125 milhões de pessoas afetadas por esta doença, globalmente. Mais de 90% dos casos de diabetes em todo o mundo estão na forma conhecida como NIDDM. A resistência à insulina é um marcador biológico proeminente da NIDDM, particularmente quando está associada à obesidade, e é definida como uma resposta biológica prejudicada à insulina exógena ou endógena. Esta resposta não está estritamente confinada à relação entre insulina e glicose, mas se estende a outras ações desse hormônio, incluindo seu efeito no metabolismo de lipídios e proteínas, função do endotélio vascular e expressão gênica.(7) . Como mais uma prova da importância da distribuição de gordura como determinante da resistência à insulina pelos lutadores de sumô(8) , os lipídios desempenham um papel complexo na homeostase da glicose em condições normais e patológicas.(2) . As lipases estão envolvidas na secreção de insulina, e a inibição farmacológica da atividade da lipase nas células ß prejudica a secreção de insulina(9) . Os íons Ca2 + são únicos entre todas as espécies de íons minerais devido ao seu grande gradiente extra intra. Os íons de Ca2 + livre intracelular são os determinantes na regulação da função cardíaca e da contração da musculatura lisa, e atuam como um fator comum final na resposta celular a vários estímulos.(1) . Até o momento, não houve estudos sobre lipase e íons Ca2 + como biomarcadores no soro sanguíneo da NIDDM. Por essa razão, estudamos agora as concentrações de lipase e íons de Ca2 + em indivíduos saudáveis normais e pacientes com DMNID.Material e métodos
Seleco de amostras Asamostras foram divididas em dois grupos - indivuos normais saudeis e indivuos NIDDM. O soro sanguíneo de cada grupo, com idade entre 35 e 45 anos, foi coletado do laboratório clínico Patiala. Cada grupo era composto por oito sujeitos que pertenciam aos sexos masculino e feminino. As amostras foram seleccionadas com base na idade, uma vez que a NIDDM se manifesta ap os 40 anos de idade.Produtos
quicos A enzima lipase foi adquirida a Hi media Laboratory Pvt. Ltd., Mumbai. Todos os outros produtos químicos e solventes do mais alto grau foram adquiridos da Loba Chemie. Pvt. Ltd., Sd bem, Mumbai.
Equipamento utilizado
Systronics UV-VIS Spectrophotometer119, Systronics Photoflourometer151 de Naroda, Ahmedabad, na Índia.
Estimativa de glicose
Os níveis de glicose foram estimados em indivíduos normais saudáveis e indivíduos com DMNID por estimativa de cobre não reduzido(11) .
Actividade lip�ica A actividade
lip�ica foi determinada em indiv�uos normais saud�eis e indiv�uos com DMNID atrav� da medi�o da forma�o de p-nitrofenol a partir de palmitato de p-nitrofenol(10) . A SDS-PAGE de pacientes normais diluídos de 20X e pacientes com DMNID foi realizada ajustando-a em um ponto isoelétrico pH = 4,65 de lipase(6)
Detecção de iões Ca2 + A
concentração de iões Ca2 + no soro sanguíneo de indivíduos saudáveis normais e indivíduos NIDDM foi determinada desenvolvendo a formação de um quelato fluorescente entre iões Ca2 + e calceína numa solução alcalina. Intensidade de fluorescência medida a 540 nm com excitação a 330 nm ou 480 nm(12) .
Análise Estatística Os
resultados são relatados em triplicado como média, que é um valor único selecionado de um grupo de valores para representar de alguma forma - um valor que deve representar todo o grupo do qual faz parte, como típico de todos os valores em o grupo.
Resultados
A atividade de glicose e lipase e concentração de íons Ca2 + são relatados em (Tabela / Fig 1) ,(Tabela / Fig 2) ,(Tabela / Fig 3) respectivamente.A atividade lipídica também foi confirmada por SDS - PAGE de 20X diluído normal individual e NIDDM sérico, ajustando - o em um ponto isoelétrico pH = 4,65 de lipase.(6) . A banda de lipase encontrada na posição 57 kDa(4) foi intenso em NIDDM do que em indivuos saudeis normais, como mostrado na [Tabela / Fig 1].Discussão
A insulina estimula a lipogênese e diminui a lipólise. O metabolismo celular do combustível eleva a razão ATP / ADP, resultando no fechamento dos canais KATP e na despolarização da célula β concomitante. Essa despolarização, por sua vez, ativa canais de Ca2 + dependentes de voltagem, resultando em influxo de Ca2 + e exocitose dependente de Ca2 +5. Portanto, com base nisso, lipase e Ca2 + são selecionados como biomarcadores. A actividade da lipase na DMNID é mais elevada do que em indivíduos saudáveis normais, enquanto a concentração de iões Ca2 + é baixa em NIDDM do que em indivíduos saudáveis normais. As lipases estão envolvidas na secreção de insulina e a inibição farmacológica da atividade da lipase nas células β prejudica a secreção de insulina(9) . Os íons Ca2 + podem dar origem a um não. de doenças que são comuns na velhice, como hipertensão, arteriosclerose, doenças neurodegenerativas, malignidade e doença articular degenerativa(3).ConclusãoA concentração de íons Ca2 + diminuiu (1,5-3,4 mg / dL) abaixo da faixa normal (8,9-10,4 mg / dL). A banda de lipase encontrada na posição 57 kDa(4) foi intensa em indivíduos com DMNID do que em indivíduos saudáveis normais. Este estudo mostra que os íons lipase e Ca2 + são biomarcadores muito importantes, pois podem ser usados para o diagnóstico de doenças. As lipases estão envolvidas na secreção de insulina e a inibição farmacológica da atividade da lipase nas células β prejudica a secreção de insulina. Uma baixa concentração de íons Ca2 + observada na NIDDM pode ser considerada alarmante, levando a múltiplas doenças. Mais estudos são necessários para estabelecer isso.Reconhecimento
A ajuda financeira para a compra dos instrumentos do Departamento de Biotecnologia, Universidade de Punjabi, Patiala, Punjab, pelo AICTE, é totalmente reconhecidaReferências1.Barbagallo M, Resnick LM, LJ Dominguez, Licata G. Diabetes, hipertensão e envelhecimento: A hipótese iônica do envelhecimento e doenças metabólicas cardiovasculares. Metabolismo do Diabetes 1997; 23: 281-94.2.Fex M, Lucas S, MS Winzell, Ahren B, Holm C, lipases de células ß Mulder H. e secreção de insulina. Diabetes 2006; 55 (Suppl.2): S24-S31.3.Paradoxo de Fujita T. Calcium: Conseqüências da deficiência de cálcio manifestada pela variedade de doenças. Jornal de Metabolismo Ósseo e Mineral 2000; 18: 234-36.4.Hayashi R, Tajima S, Yamamoto A. Purificação e caracterização da lipoproteína lipase do plasma humano pós-heparina e sua comparação com a lipase lipoproteica do leite bovino purificado. Journal of Biochemistry 1986; 100: 319-31.5.Khan AF, Goforth BP, Zhang M e Satin SL A insulina ativa os canais de K + sensíveis a ATP nas células β pancreáticas através da via dependente de fosfatidilinositol 3-quinase. Diabetes. 2001; 50: 2192-98.6.Laemmli Clivagem de proteínas estruturais durante a montagem da cabeça do bacteriófago T4. Nature 1970; 227: 680-85.7.Ludvik B, Nolan JJ, Baloga J, Sacks D, Olefsky J. Efeito da obesidade na resistência à insulina em indivíduos normais e pacientes com NIDDM. Diabetes 1995; 44: 1121-25.8.Matsuzawa Y. Fisiopatologia e mecanismos moleculares da síndrome da gordura visceral. Revisão de Metabolismo do Diabetes 1997; 13: 3-13.9.Mulder H, Yang S, MS Winzell, Holm C, Ahren B. Inibição da atividade da lipase e lipólise em ilhotas de ratos reduz a secreção de insulina. Diabetes 2004; 53: 122–28.10.Sacks, DB Carbohydrates In: Buritis, CA e Ashwood ER (ed) Teitzs livro de química clínica, 4th edn. Saunders, Filadélfia, 2005.11.Shafter e Hartmann Determinação de glicose pela estimativa de cobre não reduzido. Journal of Biological Chemistry 1920-1921; 45: 365.12.Vogel AI. Livro de texto de análise quantitativa inorgânica. 4th edn. Longman, Newyork, 1969.