Efeito cardioprotetor de Momordica Cymbalaria Fenzl em ratos com lesão miocárdica induzida por isopr

AbstratoMomordica cymbalaria (M. cymbalaria) tem valor medicinal e é usado tradicionalmente para o tratamento de vários distúrbios. No presente estudo, testamos o potencial cardioprotetor de M. cymbalaria contra o dano cardíaco induzido por isoproterenol (ISO). O pré-tratamento com extrato etanólico de M. cymbalaria nas doses de 250 e 500 mg / kg evitou a elevação das enzimas marcadoras séricas, lactato desidrogenase (LDH), creatinina quinase-MB (CK-MB), aspartato transaminase (AST), alanina transaminase (ALT ), fosfatase alcalina (ALP) e alterações nos marcadores de estresse oxidativo como peroxidase lipídica (LPO), glutationa (GSH), catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) causada pela ISO (60 mg / kg sc, 2 dias) - infarto do miocárdio induzido em ratos. O efeito protetor foi confirmado pelos achados histológicos e foi mais proeminente a 500 mg / kg. Conseqüentemente,Palavras-chaveIsoproterenol, cardioproteção, Momordica cymbalaria, isquemia miocárdica, antioxidante.
Como citar este artigo:
RAJU K, BALARAMAN, HARIPRASAD, VINOTH KUMAR M, Ali A. EFEITO CARDIOPROTECTOR DE MOMORDICA CYMBALARIA FENZL EM RATOS COM LESÃO MIOCÁRDIA INDUZIDA POR ISOPROTERENOL. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 fevereiro [citado: 2018 28 de agosto]; 2: 699-705. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=February&volume=2&issue=1&page=699-705&id=188
Os animais desenvolvem lesões semelhantes a infartos quando injetadas com isoproterenol (ISO), uma potente catecolamina sintética. Essas lesões são morfologicamente semelhantes às da 'miocitólise coagulativa' (COAM) ou degeneração miofibrilar, um dos achados no infarto agudo do miocárdio em humanos (1) . Pacientes diabéticos são mais vulneráveis a danos no miocárdio, resultando em insuficiência cardíaca do que pacientes não diabéticos (2) . Sugere-se que a insuficiência cardíaca subsequente ao infarto do miocárdio possa estar associada a um déficit antioxidante, bem como ao aumento do estresse oxidativo miocárdico (3).. Maiores concentrações séricas das enzimas aspartato transaminase (AST) e creatinina quinase (CK) atuam como marcadores e estão associadas à maior incidência de AVC após infarto agudo do miocárdio (4) . A elevação da lactato desidrogenase de ácido úrico sérico (LDH), a fração creatinina quinase-MB (CK-MB) também podem atuar como enzimas marcadoras da isquemia tecidual (5) . Um aumento na concentração de colesterol total e LDL e uma diminuição no colesterol HDL estão associados ao aumento do risco de infarto do miocárdio (6) .
Momordica cymbalaria Fenzl (Cucurbitaceae) é uma espécie encontrada nos estados indianos de Karnataka e Andhra Pradesh. O tubérculo é tradicionalmente usado como abortivo e para o tratamento do diabetes mellitus (7). Confirmamos experimentalmente sua atividade antiovulatória e abortiva (8) . Pó de frutas e extrato de M. cymbalaria são conhecidos por possuírem atividades antidiabéticas e anti-hiperlipidêmicas em modelos diabéticos experimentais. (9) , (10) , (11) . Os efeitos antidiabéticos e anti-hiperlipidêmicos dessa planta sugerem um possível efeito cardioprotetor. Muitos extratos vegetais (12) , (13) , (14) , (15) , (16) e formulações (17) , (18) , (19)são relatados como tendo atividade cardioprotetora. Entretanto, nossa revisão exaustiva da literatura não pôde revelar nenhum dado publicado sobre o efeito de M. cymbalaria na lesão miocárdica induzida experimentalmente. Portanto, este estudo foi realizado para elucidar o efeito de M. cymbalaria no dano cardíaco induzido pela ISO com referência a marcadores bioquímicos, enzimas antioxidantes, perfil lipídico e histologia.

Material e métodosAnimais experimentaisVinte e quatro ratos Wistar machos pesando 120-150 g foram adquiridos do NIMHANS (Instituto Nacional de Saúde Mental e Neuro Ciências), Bangalore (Índia). Os animais foram alojados em gaiolas de polipropileno mantidas em temperatura controlada (27 ± 2 ° C) e ciclo de luz (12 h de luz e 12 h de escuro). Eles foram alimentados com ração padrão de pellet de rato (rato Amrut e ração para camundongos, Pranav agro industries Ltd. Sangli, Índia) e água ad libitum. Os animais receberam uma semana para se acostumarem com as condições do laboratório. Todos os procedimentos com animais foram realizados de acordo com as normas do CPCSEA (Chennai, Índia). O Comitê Institucional de Ética em Animais aprovou os procedimentos experimentais.
Material vegetal
As raízes frescas de M. cymbalaria foram coletadas no distrito de Gadag, Karnataka. As raízes em pó foram extraídas com álcool etílico para obter um rendimento de 14,1% p / p. O extrato seco dissolvido em água destilada foi utilizado para o estudo. O estudo de toxicidade aguda por via oral foi realizado utilizando o procedimento up and down (diretrizes OPPTS) (8) .

Procedimento Experimental
Os ratos foram divididos em quatro grupos. Grupo I: controle (água destilada po), Grupo II: ISO (60 mg / kg, sc) em um intervalo de 24 h por dois dias (19) . Grupo III e IV: extrato etanólico de raízes de M. cymbalaria (250 e 500 mg / kg po, respectivamente) por 45 dias seguido de ISO (60 mg / kg, sc) em um intervalo de 24 h por dois dias.

AVALIAÇÃO BIOQUÍMICA
Marcador Enzimas no soro
Doze horas após a segunda injeção de ISO, os animais foram sacrificados por decapitação cervical, o sangue foi coletado e o coração foi dissecado. O soro foi imediatamente separado por centrifugação a frio e utilizado para determinação das enzimas marcadoras de enfarte do miocárdio: LDH, CK-MB, AST, ALT e ALP, juntamente com ácido úrico sérico, colesterol total, triglicéridos, LDL e HDL. As enzimas, lidos e ido ico foram estimados utilizando kits de diagntico comercial (SPAN India Ltd, Surat, India).

Estresse Oxidativo no tecido do
Coração O coração foi imediatamente lavado com solução salina gelada e um homogeneizado foi preparado em tampão Tris HCl 0,1 N (pH 7,4). O homogeneizado foi centrifugado e o sobrenadante foi coletado, o qual foi utilizado para o ensaio de LPO, GSH, CAT e SOD.

Estimativa da LPO
A extensão da peroxidação lipídica nos tecidos foi avaliada pela medida do nível de malondialdeído (MDA), conforme descrito por Wilbur et al (20) . Resumidamente, 1 ml de ácido tricloroacético (TCA) 20% e 2 ml de ácido tiobarbitúrico (TBA) 0,67% foram adicionados a 2 ml de sobrenadante homogeneizado. A absorvância da mistura foi registada a 530 nm e os valores foram expressos como ηM de MDA formado / mg de proteína.

Estimativa da atividade da
GSH no tecido cardíaco foi avaliada pelo método previamente descrito por Ellman (21). Resumidamente, 0,02 ml do sobrenadante homogeneizado foi adicionado a 3 ml de reagente de Ellman. As amostras foram misturadas e mantidas à temperatura ambiente por pelo menos 1 h. As alterações na absorvância foram lidas a 412 ηm. A quantidade de glutationa foi expressa como µg de GSH / mg de proteína.

Estimativa da atividade da SOD
O nível de SOD foi medido pelo método de Kono (22) . Resumidamente, 1,3 ml de solução A (0,1 nM EDTA contendo 50 nM Na2CO3, pH 10,3), 0,5 ml de solução B (90 M) corante nitro azul de tetrazólio (NBT) e 0,1 ml de solução C (20 mM hidrocloreto de hidroxilamina, pH 6,0) foram misturados e a taxa de redução de NBT foi registada durante 1 min a 560 ηm. A atividade da SOD foi expressa como unidade / mg de mudança de proteína na densidade óptica por min.

Estimativa da atividade da catalase
A atividade da catalase foi estimada pela determinação da decomposição de H2O2 a 240 ηm em uma mistura de ensaio contendo pho
ResultadosA mortalidade no teste de toxicidade aguda não foi observada no teste limite na dose de 5000 mg / kg. Portanto, 1/10 e 1/20 da dose foram selecionados para o estudo.O tratamento com ISO causou elevação significativa nos níveis séricos das enzimas marcadoras AST, ALT, LDH, ALP, CPK e ácido úrico em comparação ao grupo controle (Tabela / Fig. 1) . O pré-tratamento com M. cymbalaria em ambas as doses reduziu significativamente os níveis das enzimas marcadoras e do ácido úrico. O efeito foi mais proeminente na dose mais alta.

Os parâmetros lipídicos do soro - colesterol total, triglicérides, HDL, LDL e VLDL apresentaram uma elevação significativa no tratamento com ISO. O pré-tratamento com M. cymbalaria impediu a elevação desses parâmetros quando comparado aos ratos tratados com ISO. O efeito foi mais proeminente a 500 mg / kg (Tabela / Fig. 2).

Os níveis de GSH, CAT e SOD aumentaram significativamente, enquanto o malondialdeído (MDA), que é uma medida de LPO, foi significativamente reduzido após o tratamento com ISO. O tratamento profilático com M. cymbalaria a 500 mg / kg significativamente (P <0,001) alterou esses níveis de marcadores oxidativos quando comparado aos ratos tratados com ISO (Tabela / Fig. 3) .

As secções cardíacas dos animais tratados com ISO revelaram alterações degenerativas na fibra muscular, mostrando uma necrose coagulativa caracterizada por citoplasma eosinofílico mais homogéneo. Os núcleos de miofibril revelaram o núcleo picnótico. Edema intersticial estava presente nos espaços do tecido conjuntivo. O pré-tratamento com M. cymbalaria (500 mg / kg) exerceu um efeito protetor, como é evidente nas estruturas miofibrilares normais com estriações(Tabela / Fig. 4) .
DiscussãoM. cymbalaria pó de frutas e extrato foram relatados anteriormente para ter atividade antidiabética (9) , (10) , (11) . Diabetes está associado a um aumento acentuado no risco de doença cardíaca coronária. Recomenda-se que pacientes com diabetes que não tenham infarto do miocárdio devem ser tratados agressivamente com fatores de risco cardiovascular como pacientes que tiveram infarto do miocárdio (24) . Portanto, medicamentos antidiabéticos com atividade protetora cardiovascular adicional terão maior vantagem terapêutica.Espécies reativas de oxigênio (EROs) são formadas em ritmo acelerado no miocárdio tratado com ISO. Miócitos cardíacos, células endoteliais e neutrófilos infiltrantes contribuem para essa produção de ROS e podem levar à disfunção celular e necrose (25) . As lesões do tipo infarto são produzidas no miocárdio quando injetadas com o ISO. Essas lesões são morfologicamente semelhantes às da 'miocitólise coagulativa' (COAM) ou degeneração miofibrilar (1) Milei et al (26)sugeriram que a necrose miocárdica induzida pela ISO é provavelmente devida a uma ação primária na membrana sarcolemal, seguida pela estimulação da adenilato ciclase, ativação dos canais de Ca2 + e Na +, influxo de cálcio exagerado e excesso de mecanismo de acoplamento excitação-contração levando ao consumo de energia e celular morte.

Os radicais livres gerados pela ISO (27), iniciam a peroxidação lipídica dos ácidos graxos poliinsaturados ligados à membrana, levando ao comprometimento da integridade estrutural e funcional da membrana. O dano metabólico do miocárdio resulta no aumento da concentração das enzimas marcadoras como LDH, CK-MB, AST, ALP e ácido úrico. Isso também ficou evidente em nossos achados. O GSH, CAT e SOD diminuíram enquanto o LPO aumentou no homogeneizado miocárdico de ratos administrados com ISO, indicando estresse oxidativo.

M. cymbalaria (500 mg / kg) preveniu as alterações nas enzimas marcadoras do enfarte do miocárdio e o stress oxidativo juntamente com o ácido úrico. Alterações miofilâmicas como miocitose e degeneração miofibrilar são relatadas em ratos tratados com ISO (19). As secções cardíacas dos animais tratados com ISO mostraram infiltração de células inflamatórias e faltava continuidade na fibra muscular, sugerindo uma lesão celular irreversível. Ratos pré-tratados com M. cymbalaria mostraram estruturas miofibrilares normais com estriações e revelaram uma proteção marcante do extrato contra danos necróticos do miocárdio.

A administração de ISO elevou o colesterol LDL e diminuiu o nível de colesterol HDL no soro. Um aumento na concentração de colesterol total e colesterol LDL, e uma diminuição no colesterol HDL estão associados com o aumento do risco de infarto do miocárdio (6). Alto nível de colesterol circulante e seu acúmulo no tecido cardíaco é acompanhado de dano cardiovascular. M. cymbalaria elevou o nível de HDL e diminuiu o nível de colesterol LDL. Há um crescente corpo de evidências de dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais, indicando que níveis elevados de triglicérides são um fator de risco independente para doenças cardiovasculares. Os pacientes hipertrigliceridêmicos com risco para doença cardiovascular geralmente desenvolvem um perfil lipoprotéico caracterizado por níveis elevados de triglicérides, LDL denso e baixo colesterol HDL, o que causa danos à membrana miocárdica (28).. A hipertrigliceridemia observada em ratos tratados com ISO é clinicamente relatada na doença cardíaca isquêmica. O pré-tratamento com M. cymbalaria impediu a elevação dos triglicérides colesterol e LDL no soro, significando que a membrana do miocárdio está intacta e não danificada. Atividade anti-hiperlipidêmica, antioxidante e antidiabética, juntamente com as propriedades cardioprotetoras do címbalo da Momordica.
ReconhecimentoJCDR serviços pagos foram utilizados pelos autores na reformulação deste manuscrito. O Dr. Atif Ali, do Departamento de Fisiologia da Escola de Medicina da Universidade de Utah, EUA, contribuiu para reformular e reescrever parcialmente o manuscrito.Referências1.Milei J, Nunez RG, Rapaport M Cardiologia. Patogênese das lesões miocárdicas induzidas pelo isoproterenol: sua reação à 'miocitólise coagulativa' humana. Cardiologia. 1978; 63 (3): 139-512.Richard W, Nesto, Stuart Z, Infarto Agudo do Miocárdio na Circulação do Diabetes Mellitus. 1998; 97: 12-153.Colina MF, Singal PK. Alterações do estresse oxidativo e oxidativo durante a insuficiência cardíaca após infarto do miocárdio em ratos. Sou. J. Pathol. 1996; 148: 291-3004.Thompson PL, Robinson JS. Acidente vascular cerebral após infarto agudo do miocárdio: relação com o tamanho do infarto. Br Med J. 1978; 2 (6135): 457-9.5.Waring WS, Webb DJ, Maxwell SRJ. Ácido úrico como fator de risco para doença cardiovascular QJ Med 2000; 93: 707-7136.Mediene-Benchekor, T Brousseau, Richard F, Benhamamouch S, Amouyel P. Concentrações lipídicas no sangue e risco de infarto do miocárdio. The Lancet 2001; 358 (9287): 1064-10657.Nadkarni AK, Nadkarni KM. Cucurbitaceae. Indian Metria Medica 2nd ed. Bombay: Popular Book Depot; 1982. p.755
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