Estado de Peroxidação Lipídica, Glutationa, Ácido Ascórbico, Vitamina E e Enzimas Antioxidantes em P
Departamento de Bioquímica, Saveetha Medical College e Hospital, Universidade de Saveetha, Chennai, Tamil Nadu, ÍNDIA. ** Departamento de Bioquímica, Saveetha Dental College, Universidade Saveetha, Chennai, Tamil Nadu, ÍNDIA.
Endereço para correspondência :
Professor Assistente do Departamento de Bioquímica da Saveetha Medical College & Hospital, Universidade Saveetha, Chennai, Tamil Nadu, Índia.Abstrato
O estado pró-oxidante e antioxidante exato na icterícia neonatal ainda não está claro. Para adicionar um novo insight à questão, mudanças nos produtos de peroxidação lipídica eritrocitária (MDA), níveis de glutationa (GSH), ácido ascórbico e vitamina E no plasma (parâmetros antioxidantes não enzimáticos) e atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) , glutationa peroxidase (GPX), catalase em eritrócitos foram estudados em quarenta e oito pacientes com icterícia neonatal e quarenta e oito indivíduos saudáveis. Observou-se um aumento significativo nos níveis de MDA no eritrócito, atividades de SOD, GPX e uma diminuição significativa na GSH dos eritrócitos, ácido ascórbico, níveis plasmáticos de vitamina E e atividade de catalase em pacientes com icterícia neonatal quando comparados aos controles. Os resultados do nosso estudo mostraram maior produção de radicais livres de oxigênio, evidenciada pelo aumento dos níveis de MDA e diminuição dos níveis de GSH, ácido ascórbico, vitamina E e atividade catalase, suporta o estresse oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. apoia o estresse oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. apoia o estresse oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante.Palavras-chave
Malondialdeído (MDA), glutationa (GSH), ácido ascórbico, vitamina E, superóxido dismutase (SOD), catalase, glutationa peroxidase (GPX), icterícia neonatal.
Como citar este artigo:
SURAPANENI KM, VISHNU PRIYA V. ESTADO DA PEROXIDAÇÃO LIPÍDEA, GLUTATIONA, ÁCIDO ASCÓRBICO, VITAMINA E E ENZIMAS ANTIOXIDANTES EM PACIENTES DE NEONATAL. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 junho [citado: 2018 29 de agosto]; 2: 827-832. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=June&volume=2&issue=3&page=827-832&id=264
IntroduçãoA homeostase entre taxa de formação de radicais livres e a taxa de sua neutralização de radicais livres, se não for mantida, acumula dano oxidativo e é conhecido como estresse oxidativo (1). A icterícia neonatal é um evento fisiológico normal que está sendo tratado em uma crença de patologia. Comumente icterícia neonatal ocorre por dois motivos. A) Os bebês têm glóbulos vermelhos demais. É um processo natural para o corpo do bebê quebrar esse excesso de glóbulos vermelhos, formando uma grande quantidade de bilirrubina. É esta bilirrubina faz com que a pele tome uma cor amarelada. B) O fígado de um recém-nascido é imaturo e não pode processar a bilirrubina tão rapidamente quanto o bebê será capaz quando estiver mais velho. Este processamento lento da bilirrubina não tem nada a ver com doença hepática. Significa meramente que o fígado do bebê não está tão desenvolvido como será e, portanto, há algum atraso na eliminação da bilirrubina (2).. A icterícia neonatal afeta 60% dos bebês a termo e 80% dos prematuros nos primeiros 3 dias após o nascimento (3) . Apesar de transitória, a condição é responsável por até 75% das reinternações hospitalares na primeira semana após o nascimento (4) . A atividade antioxidante no soro de recém-nascidos a termo é menor que a de adultos e ainda é menor em bebês prematuros e com baixo peso ao nascer do que em bebês nascidos a termo (5) , (6) . As células vermelhas do sangue são extremamente suscetíveis à peroxidação lipídica, uma vez que são ricas em lipídios insaturados de membrana, têm um rico suprimento de oxigênio e catalisadores metálicos de transição. A membrana eritrocitária neonatal é mais suscetível ao dano oxidativo devido ao seu potencial pro-oxidante predominante (7). Os eritrócitos são particularmente propensos ao dano dos radicais livres, uma vez que os lipídios de membrana são muito ricos em ácidos graxos poliinsaturados, que desempenham um papel essencial na geração de radicais livres. Os radicais livres, principalmente as espécies reativas de oxigênio, os radicais superóxido e hidroxila, que são altamente reativos e possuem um elétron desemparelhado em uma órbita atômica ou molecular, são gerados sob condições fisiológicas durante o metabolismo aeróbico. Como os radicais livres são potencialmente tóxicos, eles geralmente são inativados ou eliminados por antioxidantes antes que possam causar danos a lipídios, proteínas ou ácidos nucléicos. Sabe-se que a alteração do perfil oxidante-antioxidante ocorre na icterícia neonatal (8) , (9). Além disso, os mecanismos de defesa do corpo desempenhariam um papel importante na forma de antioxidantes e tentam minimizar os danos, adaptando-se à situação estressante acima. Antioxidantes são compostos que eliminam, eliminam e suprimem a formação de radicais livres, ou se opõem a suas ações (1) e duas categorias principais de antioxidantes são aquelas cujo papel é prevenir a geração de radicais livres e aqueles que interceptam radicais livres que são gerado (10). Eles existem tanto no compartimento aquoso como no da membrana das células e podem ser enzimas ou não enzimas. O corpo humano possui um complexo sistema de defesa antioxidante que inclui as enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPX) e catalase (CAT). Estes bloqueiam o início de reações em cadeia de radical livre (11) . Os componentes antioxidantes não enzimáticos consistem em moléculas como glutationa (GSH), vitamina E, ácido ascórbico e beta-caroteno, que reagem com espécies de oxigênio ativadas e, assim, impedem a propagação de reações em cadeia de radicais livres.
No presente estudo, os seguintes parâmetros foram avaliados nos eritrócitos e plasma para elucidar o estado oxidante-antioxidante em pacientes com icterícia neonatal. Os níveis de malondialdeído eritrocitário (MDA) foram medidos como substâncias tio barbitúricas reagentes (TBARS) w
Material e métodos
O estudo foi conduzido no departamento de bioquímica, Dr. Pinnamaneni Siddhartha Instituto de Ciências Médicas e Fundação de Pesquisa, Chinoutpally, Gannavaram (Mandal), AP, ÍNDIA. O estudo foi realizado em quarenta e oito recém-nascidos ictéricos a termo com peso adequado, entregues normalmente na sala de parto do hospital geral Dr.PSIMS & RF, Chinoutpally. Foi assegurado que a icterícia não fosse hemolítica com a ajuda de investigações relevantes. Os níveis de bilirrubina foram monitorados para todos os bebês no intervalo de 24 horas. Todos os parâmetros foram estimados nesses bebês. Os resultados foram comparados com os de quarenta e oito neonatos que não desenvolveram icterícia no período neonatal que compuseram o grupo controle. Consentimento informado foi tomado dos pais antes de retirar sangue. A permissão devida foi obtida do comitê de ética do Dr.Os controles e pacientes foram divididos em dois grupos.
Grupo 1: Quarenta e oito crianças e bebês saudáveis pareados como controles.
Grupo 2: Quarenta e oito pacientes com icterícia neonatal.
As amostras de sangue venoso heparinizado obtidas destes sujeitos foram utilizadas para a análise. O plasma foi separado por centrifugação a 1 000 g durante 15 minutos. Utilizou-se plasma separado para a estimativa da vitamina E. Removeu-se a camada leucoplaquetária e lavaram-se as células compactadas três vezes com solução salina fisiológica. A suspensão eritrocitária foi preparada pelo método de Dodge et al., (12)modificado por Quist (13). Os concentrados foram utilizados para a análise de GSH, ácido ascórbico, MDA, SOD, catalase, GPX. A bilirrubina sérica foi estimada por bilirrubinômetro. O Eritrócito GSH foi estimado pelo método de Beutler et al (14) utilizando o ácido di-tio -benzobenzóico (DTNB). Os níveis de ácido ascórbico foram estimados no plasma pelo método de Tietz (15) . Os níveis plasmáticos de vitamina E foram estimados pelo método de Baker H et al (16) . O Eritrócito MDA foi determinado como a medida de substâncias reativas ao ácido tio barbitúrico (TBARS) (17) . A atividade da SOD (EC 1.15.1.1) foi determinada no hemolisado de acordo com o método descrito por Murklund e Murklund (18) com algumas modificações, conforme descrito por Nandi e Chatterjea (19).. A atividade da catalase (EC 1.11.1.6) foi medida no hemolisado pelo método de Sinha (20) e a atividade da glutationa peroxidase (GPX, EC 1.11.1.9) foi medida conforme descrito por Paglia e Valentine (21) em eritrócitos. Todos os reagentes utilizados foram de grau analítico de reagente. O DTNB e o tio barbitúrico foram obtidos a partir de sigma chemicals, St.Louis, MO. A análise estatística entre o grupo 1 (controles) e o grupo 2 (pacientes) foi realizada pelo teste t de Student, utilizando o pacote estat-view. Os dados foram expressos como média + DP. P <0,05 foi considerado significativo.
Resultados
A média + DP de bilirrubina sérica, GSH de eritrócitos, ácido ascórbico, MDA, SOD, pacientes com icterícia neonatal. Defesa antioxidante prejudicada e aumento da lipase catalase, GPx, vitamina E plasmática foram indicados na (Tabela / Fig. 1) . Houve um aumento estatisticamente significativo nos níveis de MDA no eritrócito em pacientes com icterícia neonatal em comparação com controles. As atividades das enzimas antioxidantes dos eritrócitos SOD e GPX foram significativamente aumentadas no grupo 2 comparado ao grupo 1. Os níveis de GSH no eritrócito, ácido ascórbico, vitamina E plasmática e atividade da catalase foram significativamente menores em pacientes com icterícia neonatal em comparação aos controles.Discussão
Os resultados indicam que há um aumento na geração de radicais livres e que a defesa antioxidante é prejudicada na peroxidação em pacientes com icterícia neonatal (8) .No presente estudo, o produto de peroxidação lipídica, ou seja, os níveis de malondialdeído (MDA) foram aumentados significativamente nos eritrócitos dos pacientes com icterícia neonatal do que no grupo controle. Isso pode mostrar a presença de aumento do estresse oxidativo. Aumento no MDA pode ser devido ao aumento da geração de espécies reativas de oxigênio (ROS), devido ao dano oxidativo excessivo gerado nesses pacientes. Estas espécies de oxigênio, por sua vez, podem oxidar muitas outras biomoléculas importantes, incluindo lipídios de membrana. O nível de MDA elevado reflete a lesão oxidativa devido à icterícia neonatal, que é atribuída à formação de radicais livres que abstrai os átomos de hidrogênio das lipoproteínas que causam peroxidação lipídica, dos quais o MDA é o principal produto (22) , (23). Os fosfolipídios da membrana, especificamente ácidos graxos poliinsaturados, são convertidos em MDA por peroxidação, que pode ser analisada por reatividade ao ácido tiobarbitúrico. Níveis aumentados de produtos de reação de ácido tiobarbitúrico foram encontrados nos eritrócitos de pacientes com icterícia neonatal (8) .
Observamos uma diminuição significativa nos níveis de glutationa reduzida (GSH), ácido ascórbico e vitamina E do plasma (sistema anti-enzimático de defesa antioxidante) em pacientes com icterícia Neonatal quando comparados aos controles. GSH, vitamina E e ácido ascórbico são importantes antioxidantes responsáveis pela destruição dos radicais livres e supressão da peroxidação na região aquosa e lipídica da célula (24) , (25). A diminuição nos níveis desses parâmetros antioxidantes não enzimáticos pode ser devido ao aumento do turnover, para prevenir o dano oxidativo nesses pacientes, sugerindo uma maior defesa contra o dano oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. Relatos semelhantes de diminuição dos níveis de GSH, ácido ascórbico e vitamina E em pacientes com icterícia neonatal foram relatados por vários estudos (9) , (26) .
Em nosso estudo, a enzima antioxidante eritrocitária, ou seja, a atividade da superóxido dismutase (SOD) e da glutationa peroxidase (GPx), aumentou significativamente em pacientes com icterícia neonatal em comparação com controles. O aumento da atividade da SOD pode ser indicativo de aumento da geração de superóxido por qualquer mecanismo como o aumento do metabolismo de catecolaminas. A SOD é a importante enzima antioxidante que possui um efeito antitóxico contra o ânion superóxido. A superexpressão da SOD pode ser uma resposta adaptativa e resulta no aumento da dismutação do superóxido em peróxido de hidrogênio. Na icterícia neonatal. Mas, por outro lado, as atividades de SOD de baixo nível de eritrócitos também foram relatadas em vários estudos (27).. A GPX, uma enzima indutível ao estresse oxidativo, desempenha um papel significativo no mecanismo de eliminação de peroxil e na manutenção da integração funcional das membranas celulares (28) . O aumento da atividade da GPX pode ser devido à sua indução para contrariar o efeito do aumento do estresse oxidativo. O GPX fornece um mecanismo de proteção eficaz contra lesões citosólicas, pois elimina H2O2 e peróxidos lipídicos por redução utilizando GSH. A diminuição do status das enzimas antioxidantes foi relatada em vários estudos (26) , (29) .
No presente estudo, observamos uma diminuição significativa na atividade da catalase em pacientes com icterícia neonatal em comparação com controles. A catalase é a enzima que protege as células do acúmulo de peróxido de hidrogênio, dismutando-a para formar água e oxigênio ou usando-a como um oxidante no qual ela funciona como uma peroxidase (30).
Referências
1.Sies H. Stress oxidativo: Da pesquisa básica à aplicação clínica. Sou. J. of Med. 1991; 91: 31S-38S.2.Icterícia e seu bebê, Mead Johnson & Company. 1993; 1-4.3.Kristin Melton, Henry T. Akinbi. Estratégias para reduzir complicações induzidas pela bilirrubina. Pós-graduação em Medicina. 1999; Nov 106 (6).4.Britton Jr., Britton HL, Beebe SA. Descarga precoce do termo recém-nascido: um dilema continuado. Pediatria 1994; 94 (3): 291-5.5.Modi N e Keay AJ Fototerapia para hiperbilirrubinemia neonatal: a importância da dose. Arco. Dis. Criança. 1983; 58: 406-409.6.Sullivan JL e Newton RB Atividade antioxidante sérica em neonatos. Arco. Dis. Criança. 1988; 63: 748-757.7.Jain SK. O eritrócito neonatal e sua suscetibilidade oxidativa. Semin. Hematol 1989; 26: 286-300.8.Ostrea E M. Jr., Cepeda EE, Fleury CA e Balun J. Peroxidação lipídica de membrana de hemácias e hemólise secundária à fototerapia. Acta Pediatri. 1985; 74: 378-381.9.Turgut M, Basaran O, M Cekmen, Karatas F, Kurt A, Aygun AD. Níveis oxidantes e antioxidantes em recém-nascidos pré-termo com hiperbilirrubinemia idiopática. J Pediatr Child Health. 2004; 40 (11): 633-637.10.Cotgreave I, Moldeus P, Orrenius S. Hospedar mecanismos de defesa bioquímicos contra pró-oxidantes. Annu Rev. Pharmacol. Toxicol 1988; 28: 189-212.11.Mahadik, SP e Soheffer, RE Lesão oxidativa e uso potencial de antioxidantes na esquizofrenia. Prostaglandinas Leukot. Essent. Ácidos graxos. 1996; 55: 45-54.12.Dodge JF, Mitchell G e Hanahan D J. A preparação e caracterização química de fantasmas livres de hemoglobina de glóbulos vermelhos humanos. Arco. Biochem. Biofísica 1968; 110: 119-130.13.Quist E H. Regulação da forma da membrana eritrocitária pelo ião cálcio. Biochem Biophys Res Commun. 1980; 92: 631-637.14.
Endereço para correspondência :
Professor Assistente do Departamento de Bioquímica da Saveetha Medical College & Hospital, Universidade Saveetha, Chennai, Tamil Nadu, Índia.Abstrato
O estado pró-oxidante e antioxidante exato na icterícia neonatal ainda não está claro. Para adicionar um novo insight à questão, mudanças nos produtos de peroxidação lipídica eritrocitária (MDA), níveis de glutationa (GSH), ácido ascórbico e vitamina E no plasma (parâmetros antioxidantes não enzimáticos) e atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) , glutationa peroxidase (GPX), catalase em eritrócitos foram estudados em quarenta e oito pacientes com icterícia neonatal e quarenta e oito indivíduos saudáveis. Observou-se um aumento significativo nos níveis de MDA no eritrócito, atividades de SOD, GPX e uma diminuição significativa na GSH dos eritrócitos, ácido ascórbico, níveis plasmáticos de vitamina E e atividade de catalase em pacientes com icterícia neonatal quando comparados aos controles. Os resultados do nosso estudo mostraram maior produção de radicais livres de oxigênio, evidenciada pelo aumento dos níveis de MDA e diminuição dos níveis de GSH, ácido ascórbico, vitamina E e atividade catalase, suporta o estresse oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. apoia o estresse oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. apoia o estresse oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante. A diminuição da concentração da glutationa e do status antioxidante da vitamina sustenta a hipótese de que a icterícia neonatal é um importante fator causal na patogênese da peroxidação lipídica. Estes dados revelam que os mecanismos de defesa antioxidante podem ser prejudicados em pacientes com icterícia neonatal. Esses achados também fornecem uma base teórica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, como a suplementação antioxidante.Palavras-chaveMalondialdeído (MDA), glutationa (GSH), ácido ascórbico, vitamina E, superóxido dismutase (SOD), catalase, glutationa peroxidase (GPX), icterícia neonatal.
Como citar este artigo:
SURAPANENI KM, VISHNU PRIYA V. ESTADO DA PEROXIDAÇÃO LIPÍDEA, GLUTATIONA, ÁCIDO ASCÓRBICO, VITAMINA E E ENZIMAS ANTIOXIDANTES EM PACIENTES DE NEONATAL. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 junho [citado: 2018 29 de agosto]; 2: 827-832. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=June&volume=2&issue=3&page=827-832&id=264
IntroduçãoA homeostase entre taxa de formação de radicais livres e a taxa de sua neutralização de radicais livres, se não for mantida, acumula dano oxidativo e é conhecido como estresse oxidativo (1). A icterícia neonatal é um evento fisiológico normal que está sendo tratado em uma crença de patologia. Comumente icterícia neonatal ocorre por dois motivos. A) Os bebês têm glóbulos vermelhos demais. É um processo natural para o corpo do bebê quebrar esse excesso de glóbulos vermelhos, formando uma grande quantidade de bilirrubina. É esta bilirrubina faz com que a pele tome uma cor amarelada. B) O fígado de um recém-nascido é imaturo e não pode processar a bilirrubina tão rapidamente quanto o bebê será capaz quando estiver mais velho. Este processamento lento da bilirrubina não tem nada a ver com doença hepática. Significa meramente que o fígado do bebê não está tão desenvolvido como será e, portanto, há algum atraso na eliminação da bilirrubina (2).. A icterícia neonatal afeta 60% dos bebês a termo e 80% dos prematuros nos primeiros 3 dias após o nascimento (3) . Apesar de transitória, a condição é responsável por até 75% das reinternações hospitalares na primeira semana após o nascimento (4) . A atividade antioxidante no soro de recém-nascidos a termo é menor que a de adultos e ainda é menor em bebês prematuros e com baixo peso ao nascer do que em bebês nascidos a termo (5) , (6) . As células vermelhas do sangue são extremamente suscetíveis à peroxidação lipídica, uma vez que são ricas em lipídios insaturados de membrana, têm um rico suprimento de oxigênio e catalisadores metálicos de transição. A membrana eritrocitária neonatal é mais suscetível ao dano oxidativo devido ao seu potencial pro-oxidante predominante (7). Os eritrócitos são particularmente propensos ao dano dos radicais livres, uma vez que os lipídios de membrana são muito ricos em ácidos graxos poliinsaturados, que desempenham um papel essencial na geração de radicais livres. Os radicais livres, principalmente as espécies reativas de oxigênio, os radicais superóxido e hidroxila, que são altamente reativos e possuem um elétron desemparelhado em uma órbita atômica ou molecular, são gerados sob condições fisiológicas durante o metabolismo aeróbico. Como os radicais livres são potencialmente tóxicos, eles geralmente são inativados ou eliminados por antioxidantes antes que possam causar danos a lipídios, proteínas ou ácidos nucléicos. Sabe-se que a alteração do perfil oxidante-antioxidante ocorre na icterícia neonatal (8) , (9). Além disso, os mecanismos de defesa do corpo desempenhariam um papel importante na forma de antioxidantes e tentam minimizar os danos, adaptando-se à situação estressante acima. Antioxidantes são compostos que eliminam, eliminam e suprimem a formação de radicais livres, ou se opõem a suas ações (1) e duas categorias principais de antioxidantes são aquelas cujo papel é prevenir a geração de radicais livres e aqueles que interceptam radicais livres que são gerado (10). Eles existem tanto no compartimento aquoso como no da membrana das células e podem ser enzimas ou não enzimas. O corpo humano possui um complexo sistema de defesa antioxidante que inclui as enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPX) e catalase (CAT). Estes bloqueiam o início de reações em cadeia de radical livre (11) . Os componentes antioxidantes não enzimáticos consistem em moléculas como glutationa (GSH), vitamina E, ácido ascórbico e beta-caroteno, que reagem com espécies de oxigênio ativadas e, assim, impedem a propagação de reações em cadeia de radicais livres.No presente estudo, os seguintes parâmetros foram avaliados nos eritrócitos e plasma para elucidar o estado oxidante-antioxidante em pacientes com icterícia neonatal. Os níveis de malondialdeído eritrocitário (MDA) foram medidos como substâncias tio barbitúricas reagentes (TBARS) w
Material e métodos
O estudo foi conduzido no departamento de bioquímica, Dr. Pinnamaneni Siddhartha Instituto de Ciências Médicas e Fundação de Pesquisa, Chinoutpally, Gannavaram (Mandal), AP, ÍNDIA. O estudo foi realizado em quarenta e oito recém-nascidos ictéricos a termo com peso adequado, entregues normalmente na sala de parto do hospital geral Dr.PSIMS & RF, Chinoutpally. Foi assegurado que a icterícia não fosse hemolítica com a ajuda de investigações relevantes. Os níveis de bilirrubina foram monitorados para todos os bebês no intervalo de 24 horas. Todos os parâmetros foram estimados nesses bebês. Os resultados foram comparados com os de quarenta e oito neonatos que não desenvolveram icterícia no período neonatal que compuseram o grupo controle. Consentimento informado foi tomado dos pais antes de retirar sangue. A permissão devida foi obtida do comitê de ética do Dr.Os controles e pacientes foram divididos em dois grupos.Grupo 1: Quarenta e oito crianças e bebês saudáveis pareados como controles.
Grupo 2: Quarenta e oito pacientes com icterícia neonatal.
As amostras de sangue venoso heparinizado obtidas destes sujeitos foram utilizadas para a análise. O plasma foi separado por centrifugação a 1 000 g durante 15 minutos. Utilizou-se plasma separado para a estimativa da vitamina E. Removeu-se a camada leucoplaquetária e lavaram-se as células compactadas três vezes com solução salina fisiológica. A suspensão eritrocitária foi preparada pelo método de Dodge et al., (12)modificado por Quist (13). Os concentrados foram utilizados para a análise de GSH, ácido ascórbico, MDA, SOD, catalase, GPX. A bilirrubina sérica foi estimada por bilirrubinômetro. O Eritrócito GSH foi estimado pelo método de Beutler et al (14) utilizando o ácido di-tio -benzobenzóico (DTNB). Os níveis de ácido ascórbico foram estimados no plasma pelo método de Tietz (15) . Os níveis plasmáticos de vitamina E foram estimados pelo método de Baker H et al (16) . O Eritrócito MDA foi determinado como a medida de substâncias reativas ao ácido tio barbitúrico (TBARS) (17) . A atividade da SOD (EC 1.15.1.1) foi determinada no hemolisado de acordo com o método descrito por Murklund e Murklund (18) com algumas modificações, conforme descrito por Nandi e Chatterjea (19).. A atividade da catalase (EC 1.11.1.6) foi medida no hemolisado pelo método de Sinha (20) e a atividade da glutationa peroxidase (GPX, EC 1.11.1.9) foi medida conforme descrito por Paglia e Valentine (21) em eritrócitos. Todos os reagentes utilizados foram de grau analítico de reagente. O DTNB e o tio barbitúrico foram obtidos a partir de sigma chemicals, St.Louis, MO. A análise estatística entre o grupo 1 (controles) e o grupo 2 (pacientes) foi realizada pelo teste t de Student, utilizando o pacote estat-view. Os dados foram expressos como média + DP. P <0,05 foi considerado significativo.
Resultados
A média + DP de bilirrubina sérica, GSH de eritrócitos, ácido ascórbico, MDA, SOD, pacientes com icterícia neonatal. Defesa antioxidante prejudicada e aumento da lipase catalase, GPx, vitamina E plasmática foram indicados na (Tabela / Fig. 1) . Houve um aumento estatisticamente significativo nos níveis de MDA no eritrócito em pacientes com icterícia neonatal em comparação com controles. As atividades das enzimas antioxidantes dos eritrócitos SOD e GPX foram significativamente aumentadas no grupo 2 comparado ao grupo 1. Os níveis de GSH no eritrócito, ácido ascórbico, vitamina E plasmática e atividade da catalase foram significativamente menores em pacientes com icterícia neonatal em comparação aos controles.DiscussãoOs resultados indicam que há um aumento na geração de radicais livres e que a defesa antioxidante é prejudicada na peroxidação em pacientes com icterícia neonatal (8) .No presente estudo, o produto de peroxidação lipídica, ou seja, os níveis de malondialdeído (MDA) foram aumentados significativamente nos eritrócitos dos pacientes com icterícia neonatal do que no grupo controle. Isso pode mostrar a presença de aumento do estresse oxidativo. Aumento no MDA pode ser devido ao aumento da geração de espécies reativas de oxigênio (ROS), devido ao dano oxidativo excessivo gerado nesses pacientes. Estas espécies de oxigênio, por sua vez, podem oxidar muitas outras biomoléculas importantes, incluindo lipídios de membrana. O nível de MDA elevado reflete a lesão oxidativa devido à icterícia neonatal, que é atribuída à formação de radicais livres que abstrai os átomos de hidrogênio das lipoproteínas que causam peroxidação lipídica, dos quais o MDA é o principal produto (22) , (23). Os fosfolipídios da membrana, especificamente ácidos graxos poliinsaturados, são convertidos em MDA por peroxidação, que pode ser analisada por reatividade ao ácido tiobarbitúrico. Níveis aumentados de produtos de reação de ácido tiobarbitúrico foram encontrados nos eritrócitos de pacientes com icterícia neonatal (8) .Observamos uma diminuição significativa nos níveis de glutationa reduzida (GSH), ácido ascórbico e vitamina E do plasma (sistema anti-enzimático de defesa antioxidante) em pacientes com icterícia Neonatal quando comparados aos controles. GSH, vitamina E e ácido ascórbico são importantes antioxidantes responsáveis pela destruição dos radicais livres e supressão da peroxidação na região aquosa e lipídica da célula (24) , (25). A diminuição nos níveis desses parâmetros antioxidantes não enzimáticos pode ser devido ao aumento do turnover, para prevenir o dano oxidativo nesses pacientes, sugerindo uma maior defesa contra o dano oxidativo em pacientes com icterícia neonatal. Relatos semelhantes de diminuição dos níveis de GSH, ácido ascórbico e vitamina E em pacientes com icterícia neonatal foram relatados por vários estudos (9) , (26) .
Em nosso estudo, a enzima antioxidante eritrocitária, ou seja, a atividade da superóxido dismutase (SOD) e da glutationa peroxidase (GPx), aumentou significativamente em pacientes com icterícia neonatal em comparação com controles. O aumento da atividade da SOD pode ser indicativo de aumento da geração de superóxido por qualquer mecanismo como o aumento do metabolismo de catecolaminas. A SOD é a importante enzima antioxidante que possui um efeito antitóxico contra o ânion superóxido. A superexpressão da SOD pode ser uma resposta adaptativa e resulta no aumento da dismutação do superóxido em peróxido de hidrogênio. Na icterícia neonatal. Mas, por outro lado, as atividades de SOD de baixo nível de eritrócitos também foram relatadas em vários estudos (27).. A GPX, uma enzima indutível ao estresse oxidativo, desempenha um papel significativo no mecanismo de eliminação de peroxil e na manutenção da integração funcional das membranas celulares (28) . O aumento da atividade da GPX pode ser devido à sua indução para contrariar o efeito do aumento do estresse oxidativo. O GPX fornece um mecanismo de proteção eficaz contra lesões citosólicas, pois elimina H2O2 e peróxidos lipídicos por redução utilizando GSH. A diminuição do status das enzimas antioxidantes foi relatada em vários estudos (26) , (29) .
No presente estudo, observamos uma diminuição significativa na atividade da catalase em pacientes com icterícia neonatal em comparação com controles. A catalase é a enzima que protege as células do acúmulo de peróxido de hidrogênio, dismutando-a para formar água e oxigênio ou usando-a como um oxidante no qual ela funciona como uma peroxidase (30).
Referências
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