Estudos in vivo sobre o potencial imunomodulador de extratos aquosos de aveia
Abstrato
Um número de estudos foi realizado para selecionar plantas para seu potencial medicinal e isolar compostos químicos bioativos, mas somente alguns estudos foram feitos para descobrir o potencial immunomodulatory das plantas. O beta-glucano, um dos constituintes químicos dos fungos, demonstrou ser um agente imunopotenciador. O beta-glucano foi encontrado em cereais. Assim, no presente estudo, foram feitas tentativas para avaliar o potencial imunomodulador da aveia, um cereal contendo beta-glucana. Extratos aquosos de sementes e folhas de aveia foram avaliados in vivo em camundongos albinos suíços quanto ao seu potencial imunomodulador. Nitro Blue Redução de tetrazólio (NBT), óxido nítrico sintético indutível (INOS), Fagocitose (atividade bactericida) e ELISA foram vários testes empregados para avaliar o efeito de extratos de aveia sobre o estado imunológico dos animais. Os resultados revelaram que tanto o extrato aquoso de semente de aveia quanto o extrato de folhas foram imunopotenciados, sendo o primeiro mais bioativo.Palavras-chaveAveia, Óxido Nítrico Indutível Sintase, Redução Nitro Azul de Tetrazólio (NBT), Fagocitose, ELISA.
Como citar este artigo:
DHILLON P, BHATIA A. ESTUDOS IN VIVO SOBRE O POTENCIAL IMUNOMODULATÓRIO DE EXTRATOS AQUOSOS DE AVEIA. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 junho [citado: 2018 29 de agosto]; 2: 887-891. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=June&volume=2&issue=3&page=887-891&id=268
INTRODUÇÃOCom o aumento da incidência de distúrbios imunológicos devido a doenças imunossupressoras ou inflamatórias, existe a necessidade de desenvolver novos imunoterápicos que sejam rentáveis e possuam uma ampla gama de potencial de cura da doença. Vários estudos foram realizados para selecionar plantas quanto ao seu potencial medicinal e isolar compostos químicos bioativos. Mas apenas alguns estudos foram realizados para verificar o potencial imunomodulador das plantas (12) .
O beta-glucano é um dos constituintes químicos dos fungos, o qual apresenta imunopotenciação. Beta-glucano foi relatado em cereais (4), mas quase nenhum trabalho foi realizado para ver o potencial imunomodulador dos extratos brutos de cereais. Assim, no presente estudo, foram feitas tentativas para avaliar o potencial imunomodulador de extratos aquosos de aveia.
Material e métodos
Animais: Ratinhos albinos Swiss, com 3-4 semanas de idade e pesando 20-25 g, foram obtidos a partir da casa de animais, Punjab University, Chandigarh, e foram mantidos com uma dieta de laboratio padr e ua. Os animais foram aclimatados às condições do biotério da universidade por 2-3 semanas antes da experimentação. Os animais utilizados para as experiências tinham 6-8 semanas de idade. Todos os experimentos foram empregados de acordo com o comitê de ética institucional.Material da planta: As sementes de aveia e as folhas foram coletadas e secas à sombra para preparar os extratos.
Preparação de Extrato Aquoso:Folhas secas e em pó de aveia e sementes pesando 5gms foram suspensas em 50ml de água destilada e agitadas por 5-8 horas em um agitador magnético. A suspens foi filtrada atrav de papel de filtro Whatman e, finalmente, atrav de filtros Millipore de 0,45 e foi armazenada a 4.
Grupos de Animais Utilizados: Os
animais foram divididos nos seguintes grupos.
Grupo I: grupo de controle.
Grupo II: Animais tratados com extrato de sementes aquosas de aveia (OSEaq)
Grupo III: Animais tratados com extrato de folhas de aveia aquosas (OLEaq)
Inoculação dos extratos:Os ratinhos foram inoculados com doses não letais de qualquer um dos extractos. Os extratos foram inoculados em cada animal em dez doses iguais durante um período de 30 dias. O volume de cada dose foi restringido a 0,2 ml, de modo que cada ratinho recebeu uma dose total de 2 ml, ie 0,12 g / kg de peso corporal em 10 doses, seguida de imunização.
Imunização: Os animais foram imunizados com 3 doses de BSA por via intraperitoneal em intervalos semanais durante o curso da inoculação do extrato.
Acompanhamento do estudo: Após ter completado o cronograma de inoculação do extrato, os animais foram sacrificados. Os baços dos animais foram removidos para estudar os parâmetros imunológicos. Os baços foram perfundidos com MEM e depois provocados por esplenócitos.
Parâmetros imunológicos:
Foram realizados os seguintes testes para verificar o estado imunitário dos animais:
Teste de Redução de Tetrazólio de Nitroblue (NBT)
Teste de sintase de óxido nítrico indutível (INO'S)
Actividade Bactericida
ELISA
(1) Teste de Redução de Tetrazólio Nitroblue (NBT): O teste foi realizado pelo método espectrofotométrico como é dado no livro de mão de Practical Immunology por Hudson e Hay (6) . O teste baseia-se no princípio de que NBT na redução, forma uma formazen de cor azul que é extraível em dioxano. A formazen extraída foi medida a 520 nm usando dioxano como branco.
(2) Atividade da óxido nítrico sintetase indutível:O teste foi realizado empregando um método espectrofotométrico como Stuehr e Marletta (13) , baseado no princípio de que os imunócitos ativados expressam alto nível de óxido nítrico sintase que oxida a arginina em citrulina. O óxido nítrico formado, foi medido espectrofotometricamente a 540nm.
(3) Atividade bactericida: A atividade bactericida dos esplenócitos foi estimada usando o método dado no manual de técnicas laboratoriais de Raghuramulu et al (8) . A actividade bactericida dos esplenitos foi avaliada incubando-os na presen de E. coli e mediu-se o nero de bactias vieis utilizando a suspens bacteriana como controlo.
(4) ELISA:O desenvolvimento dos anticorpos anti-albumina BSA foi observado por um teste ELISA, como indicado no manual prático de Bhatia A.3. A absorvância foi medida utilizando um leitor ELISA (BIORAD) a 492 nm.
Análise estatística: A análise estatística foi realizada pelo teste t de Student para acessar o efeito dos extratos de aveia sobre a resposta imune.
Resultados
Efeito de extratos de aveia na resposta imune humoral : (Tabela / Fig. 1)Os títulos de anticorpos dos animais tratados com extrato e controle foram medidos por ELISA. Os resultados revelaram um aumento de 4 vezes no título de anticorpos em animais tratados com OSEaq, mas não houve aumento significativo no título de anticorpos em animais tratados com OLEaq em comparação com o controlo.
Efeito dos extratos de aveia na resposta imune mediada por células : (Tabela / Fig. 2) e (Tabela / Fig. 3)
Os testes empregados para avaliar a resposta imune mediada por células foram o teste de redução de NBT, a atividade de INO e a atividade fagocitária. Os valores de redução de NBT, atividade de INO e atividade fagocítica foram maiores em animais tratados com extrato de sementes de aveia, em comparação com animais tratados com OLEaq e animais não tratados [Tabela / Fig. 2], [Tabela / Fig 3]. A redução do NBT foi 1,7 vezes maior em camundongos tratados com OSEaq (62,75%), e foi 1 vez maior em camundongos tratados com OLEaq (39,55%), em comparação com os animais controle (36,58%). Da mesma forma, um aumento de 2,4 vezes na atividade do INO foi observado nos animais tratados com extrato OSEaq (68,75%), e um aumento de 1,0 vez nos animais tratados com extrato OLEaq (27,96%), em comparação aos animais controles (27,75%). A atividade fagocítica foi 2,6 vezes maior em animais tratados com OSEaq (61,35%) e 1,2 vezes maior em animais tratados com OSEaq (27.
Discussão
O presente estudo foi conduzido para avaliar o potencial imunomodulador de uma planta contendo beta-glucana, aveia (Avena sativa). Folhas aquosas e extratos de sementes foram avaliados quanto à atividade imunomoduladora em camundongos, empregando redução de NBT (6) , atividade de INO (10) , fagocitose (atividade bactericida) (8) e ELISA (3) . Os resultados revelam que tanto folhas quanto extratos de sementes aumentaram a atividade imunológica do hospedeiro. O extrato aquoso de sementes de aveia (Avena sativa) apresenta maior atividade imunopotenciadora ou modulação da resposta imune mediada por células, quando comparado ao extrato aquoso de folhas de aveia (Avena sativa).Foram avaliadas as propriedades imunomoduladoras in vivo de extratos aquosos de sementes e folhas de aveia (Avena sativa). Estudos anteriores revelaram que o beta-glucano dos fungos tem atividade imunomoduladora (13) . Por outro lado, o beta-glucano tem sido relatado como presente em cereais, incluindo aveia (5) . Os resultados do nosso estudo revelam mais bioatividade no extrato de sementes do que no extrato de folhas. A literatura também mostra que as sementes têm mais beta-glucana do que as folhas. Assim, a melhor atividade das sementes em nosso estudo pode ser principalmente devido ao seu conteúdo de beta-glucana. Muitos estudos de plantas foram realizados usando extratos brutos (1) , (9) , (11) para verificar suas bioatividades. Mesmo em ayurvédica (12) , unani(2) ou medicamentos chineses (7) , (13) , formulações tradicionais contendo combinações de várias ervas ou ervas em combinação com minerais têm sido usadas. Embora possa ser racional usar uma única planta ou seus constituintes isolados, tem sido uma experiência geral que o extrato total da planta apresenta mais eficácia do que os constituintes isolados (9) . Além disso, OSEaq pode ser empregado como tal, ao invés de BG purificada, devido à sua boa atividade imunopotenciadora e custo-efetividade. As presentes descobertas são significativas para o desenvolvimento de estratégias alternativas, baratas e talvez mais seguras para impulsionar o sistema imunológico.Referências
1.Atal CK, Sharma M, Kaul A, Khajuria A. Agentes imunomoduladores de origem vegetal 1: Triagem Preliminar. Journal of Ethnopharmacology 1986; 18: 133-141.2.Bajaj S, Ahmad I, Fátima M, Raisuddin S, Vohora SB. Atividade imunomoduladora de uma preparação de ouro Unani usada no sistema indiano de medicina. Imunofarmacologia e Imunotoxicologia 1999; 21: 151-161.3.Bhatia A. Manual de imunologia prática, Palani Paramount Publication, Palani, Tamil Nadu; 2001.4.Brennan CS, Cleary LJ. O uso potencial de cereais (1 → 3,1 → 4) -β-d-glucanos como ingredientes alimentares funcionais. Journal of Cereal Science 2005; 42: 1-13.5.Estrada A, Yun CH, Kessel A, B Li, Hauta S, Laarveld B. Actividades imunomoduladoras de beta-glucana de aveia in vitro e in vivo. Microbiol Immunol. 1997; 41: 991-8.6.Hudson L, Hay FC. O livro de mão da Practical Immunology, terceira edição, Oxford: Blackwell Scientific Publication, Londres; 19897.Nakai S, Kawakita T, N de Zhou, Matsuura K, Oka M, Nagasawa H, Saito Y, Suzuki UM, Himeno K, Nomoto K. Tratamento efeito de uma medicina chinesa tradicional, Ren-shen-yang-rong-tang (nome japonês : Ninjinyouei-to), em ratinhos MRL autoimunes: MP-lpr: lpr. International Journal of Immunopharmacology 1993; 15: 589-596.8.Raghuramulu N, KM Nair, Kalyansundaram SA. Manual de técnicas de laboratório do NINICMR Hyderabad India; 1983.9.Souza M, Kern M., Floriani P, Cechinel-Filho V. Propriedades analgésicas de um extrato hidroalcoólico obtido de Alternanthera brasiliana. Pesquisa de Fitoterapia de 1998; 12: 279-281.10.Stuehr DJ, Marletta M A. Síntese de Nitrito e Nitrato em Linhas Celulares de Macrófagos Murinos. Cancer Res. 1987; 47: 5590-5594.11.Yamaguchi H. Imunomodulação por plantas medicinais. Avanços em Medicina Experimental e Biologia, 1992; 319: 287-297.12.Ziaudidin M, N Phansaklar, Patki P, Diwanay S, Patwardhan B. Estudos sobre o efeito imunomodulador de Ashwagandha. Journal of Ethnopharmacology 1996; 50: 69-76.
Um número de estudos foi realizado para selecionar plantas para seu potencial medicinal e isolar compostos químicos bioativos, mas somente alguns estudos foram feitos para descobrir o potencial immunomodulatory das plantas. O beta-glucano, um dos constituintes químicos dos fungos, demonstrou ser um agente imunopotenciador. O beta-glucano foi encontrado em cereais. Assim, no presente estudo, foram feitas tentativas para avaliar o potencial imunomodulador da aveia, um cereal contendo beta-glucana. Extratos aquosos de sementes e folhas de aveia foram avaliados in vivo em camundongos albinos suíços quanto ao seu potencial imunomodulador. Nitro Blue Redução de tetrazólio (NBT), óxido nítrico sintético indutível (INOS), Fagocitose (atividade bactericida) e ELISA foram vários testes empregados para avaliar o efeito de extratos de aveia sobre o estado imunológico dos animais. Os resultados revelaram que tanto o extrato aquoso de semente de aveia quanto o extrato de folhas foram imunopotenciados, sendo o primeiro mais bioativo.Palavras-chaveAveia, Óxido Nítrico Indutível Sintase, Redução Nitro Azul de Tetrazólio (NBT), Fagocitose, ELISA.Como citar este artigo:
DHILLON P, BHATIA A. ESTUDOS IN VIVO SOBRE O POTENCIAL IMUNOMODULATÓRIO DE EXTRATOS AQUOSOS DE AVEIA. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 junho [citado: 2018 29 de agosto]; 2: 887-891. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=June&volume=2&issue=3&page=887-891&id=268
INTRODUÇÃOCom o aumento da incidência de distúrbios imunológicos devido a doenças imunossupressoras ou inflamatórias, existe a necessidade de desenvolver novos imunoterápicos que sejam rentáveis e possuam uma ampla gama de potencial de cura da doença. Vários estudos foram realizados para selecionar plantas quanto ao seu potencial medicinal e isolar compostos químicos bioativos. Mas apenas alguns estudos foram realizados para verificar o potencial imunomodulador das plantas (12) .O beta-glucano é um dos constituintes químicos dos fungos, o qual apresenta imunopotenciação. Beta-glucano foi relatado em cereais (4), mas quase nenhum trabalho foi realizado para ver o potencial imunomodulador dos extratos brutos de cereais. Assim, no presente estudo, foram feitas tentativas para avaliar o potencial imunomodulador de extratos aquosos de aveia.
Material e métodos
Animais: Ratinhos albinos Swiss, com 3-4 semanas de idade e pesando 20-25 g, foram obtidos a partir da casa de animais, Punjab University, Chandigarh, e foram mantidos com uma dieta de laboratio padr e ua. Os animais foram aclimatados às condições do biotério da universidade por 2-3 semanas antes da experimentação. Os animais utilizados para as experiências tinham 6-8 semanas de idade. Todos os experimentos foram empregados de acordo com o comitê de ética institucional.Material da planta: As sementes de aveia e as folhas foram coletadas e secas à sombra para preparar os extratos.Preparação de Extrato Aquoso:Folhas secas e em pó de aveia e sementes pesando 5gms foram suspensas em 50ml de água destilada e agitadas por 5-8 horas em um agitador magnético. A suspens foi filtrada atrav de papel de filtro Whatman e, finalmente, atrav de filtros Millipore de 0,45 e foi armazenada a 4.
Grupos de Animais Utilizados: Os
animais foram divididos nos seguintes grupos.
Grupo I: grupo de controle.
Grupo II: Animais tratados com extrato de sementes aquosas de aveia (OSEaq)
Grupo III: Animais tratados com extrato de folhas de aveia aquosas (OLEaq)
Inoculação dos extratos:Os ratinhos foram inoculados com doses não letais de qualquer um dos extractos. Os extratos foram inoculados em cada animal em dez doses iguais durante um período de 30 dias. O volume de cada dose foi restringido a 0,2 ml, de modo que cada ratinho recebeu uma dose total de 2 ml, ie 0,12 g / kg de peso corporal em 10 doses, seguida de imunização.
Imunização: Os animais foram imunizados com 3 doses de BSA por via intraperitoneal em intervalos semanais durante o curso da inoculação do extrato.
Acompanhamento do estudo: Após ter completado o cronograma de inoculação do extrato, os animais foram sacrificados. Os baços dos animais foram removidos para estudar os parâmetros imunológicos. Os baços foram perfundidos com MEM e depois provocados por esplenócitos.
Parâmetros imunológicos:
Foram realizados os seguintes testes para verificar o estado imunitário dos animais:
Teste de Redução de Tetrazólio de Nitroblue (NBT)
Teste de sintase de óxido nítrico indutível (INO'S)
Actividade Bactericida
ELISA
(1) Teste de Redução de Tetrazólio Nitroblue (NBT): O teste foi realizado pelo método espectrofotométrico como é dado no livro de mão de Practical Immunology por Hudson e Hay (6) . O teste baseia-se no princípio de que NBT na redução, forma uma formazen de cor azul que é extraível em dioxano. A formazen extraída foi medida a 520 nm usando dioxano como branco.
(2) Atividade da óxido nítrico sintetase indutível:O teste foi realizado empregando um método espectrofotométrico como Stuehr e Marletta (13) , baseado no princípio de que os imunócitos ativados expressam alto nível de óxido nítrico sintase que oxida a arginina em citrulina. O óxido nítrico formado, foi medido espectrofotometricamente a 540nm.
(3) Atividade bactericida: A atividade bactericida dos esplenócitos foi estimada usando o método dado no manual de técnicas laboratoriais de Raghuramulu et al (8) . A actividade bactericida dos esplenitos foi avaliada incubando-os na presen de E. coli e mediu-se o nero de bactias vieis utilizando a suspens bacteriana como controlo.
(4) ELISA:O desenvolvimento dos anticorpos anti-albumina BSA foi observado por um teste ELISA, como indicado no manual prático de Bhatia A.3. A absorvância foi medida utilizando um leitor ELISA (BIORAD) a 492 nm.
Análise estatística: A análise estatística foi realizada pelo teste t de Student para acessar o efeito dos extratos de aveia sobre a resposta imune.
Resultados
Efeito de extratos de aveia na resposta imune humoral : (Tabela / Fig. 1)Os títulos de anticorpos dos animais tratados com extrato e controle foram medidos por ELISA. Os resultados revelaram um aumento de 4 vezes no título de anticorpos em animais tratados com OSEaq, mas não houve aumento significativo no título de anticorpos em animais tratados com OLEaq em comparação com o controlo.Efeito dos extratos de aveia na resposta imune mediada por células : (Tabela / Fig. 2) e (Tabela / Fig. 3)
Os testes empregados para avaliar a resposta imune mediada por células foram o teste de redução de NBT, a atividade de INO e a atividade fagocitária. Os valores de redução de NBT, atividade de INO e atividade fagocítica foram maiores em animais tratados com extrato de sementes de aveia, em comparação com animais tratados com OLEaq e animais não tratados [Tabela / Fig. 2], [Tabela / Fig 3]. A redução do NBT foi 1,7 vezes maior em camundongos tratados com OSEaq (62,75%), e foi 1 vez maior em camundongos tratados com OLEaq (39,55%), em comparação com os animais controle (36,58%). Da mesma forma, um aumento de 2,4 vezes na atividade do INO foi observado nos animais tratados com extrato OSEaq (68,75%), e um aumento de 1,0 vez nos animais tratados com extrato OLEaq (27,96%), em comparação aos animais controles (27,75%). A atividade fagocítica foi 2,6 vezes maior em animais tratados com OSEaq (61,35%) e 1,2 vezes maior em animais tratados com OSEaq (27.
Discussão
O presente estudo foi conduzido para avaliar o potencial imunomodulador de uma planta contendo beta-glucana, aveia (Avena sativa). Folhas aquosas e extratos de sementes foram avaliados quanto à atividade imunomoduladora em camundongos, empregando redução de NBT (6) , atividade de INO (10) , fagocitose (atividade bactericida) (8) e ELISA (3) . Os resultados revelam que tanto folhas quanto extratos de sementes aumentaram a atividade imunológica do hospedeiro. O extrato aquoso de sementes de aveia (Avena sativa) apresenta maior atividade imunopotenciadora ou modulação da resposta imune mediada por células, quando comparado ao extrato aquoso de folhas de aveia (Avena sativa).Foram avaliadas as propriedades imunomoduladoras in vivo de extratos aquosos de sementes e folhas de aveia (Avena sativa). Estudos anteriores revelaram que o beta-glucano dos fungos tem atividade imunomoduladora (13) . Por outro lado, o beta-glucano tem sido relatado como presente em cereais, incluindo aveia (5) . Os resultados do nosso estudo revelam mais bioatividade no extrato de sementes do que no extrato de folhas. A literatura também mostra que as sementes têm mais beta-glucana do que as folhas. Assim, a melhor atividade das sementes em nosso estudo pode ser principalmente devido ao seu conteúdo de beta-glucana. Muitos estudos de plantas foram realizados usando extratos brutos (1) , (9) , (11) para verificar suas bioatividades. Mesmo em ayurvédica (12) , unani(2) ou medicamentos chineses (7) , (13) , formulações tradicionais contendo combinações de várias ervas ou ervas em combinação com minerais têm sido usadas. Embora possa ser racional usar uma única planta ou seus constituintes isolados, tem sido uma experiência geral que o extrato total da planta apresenta mais eficácia do que os constituintes isolados (9) . Além disso, OSEaq pode ser empregado como tal, ao invés de BG purificada, devido à sua boa atividade imunopotenciadora e custo-efetividade. As presentes descobertas são significativas para o desenvolvimento de estratégias alternativas, baratas e talvez mais seguras para impulsionar o sistema imunológico.Referências1.Atal CK, Sharma M, Kaul A, Khajuria A. Agentes imunomoduladores de origem vegetal 1: Triagem Preliminar. Journal of Ethnopharmacology 1986; 18: 133-141.2.Bajaj S, Ahmad I, Fátima M, Raisuddin S, Vohora SB. Atividade imunomoduladora de uma preparação de ouro Unani usada no sistema indiano de medicina. Imunofarmacologia e Imunotoxicologia 1999; 21: 151-161.3.Bhatia A. Manual de imunologia prática, Palani Paramount Publication, Palani, Tamil Nadu; 2001.4.Brennan CS, Cleary LJ. O uso potencial de cereais (1 → 3,1 → 4) -β-d-glucanos como ingredientes alimentares funcionais. Journal of Cereal Science 2005; 42: 1-13.5.Estrada A, Yun CH, Kessel A, B Li, Hauta S, Laarveld B. Actividades imunomoduladoras de beta-glucana de aveia in vitro e in vivo. Microbiol Immunol. 1997; 41: 991-8.6.Hudson L, Hay FC. O livro de mão da Practical Immunology, terceira edição, Oxford: Blackwell Scientific Publication, Londres; 19897.Nakai S, Kawakita T, N de Zhou, Matsuura K, Oka M, Nagasawa H, Saito Y, Suzuki UM, Himeno K, Nomoto K. Tratamento efeito de uma medicina chinesa tradicional, Ren-shen-yang-rong-tang (nome japonês : Ninjinyouei-to), em ratinhos MRL autoimunes: MP-lpr: lpr. International Journal of Immunopharmacology 1993; 15: 589-596.8.Raghuramulu N, KM Nair, Kalyansundaram SA. Manual de técnicas de laboratório do NINICMR Hyderabad India; 1983.9.Souza M, Kern M., Floriani P, Cechinel-Filho V. Propriedades analgésicas de um extrato hidroalcoólico obtido de Alternanthera brasiliana. Pesquisa de Fitoterapia de 1998; 12: 279-281.10.Stuehr DJ, Marletta M A. Síntese de Nitrito e Nitrato em Linhas Celulares de Macrófagos Murinos. Cancer Res. 1987; 47: 5590-5594.11.Yamaguchi H. Imunomodulação por plantas medicinais. Avanços em Medicina Experimental e Biologia, 1992; 319: 287-297.12.Ziaudidin M, N Phansaklar, Patki P, Diwanay S, Patwardhan B. Estudos sobre o efeito imunomodulador de Ashwagandha. Journal of Ethnopharmacology 1996; 50: 69-76.
