Talassemia e distúrbios da hemoglobina na província de Khuzestan, no Irã
Centro de pesquisa de talassemia e hemoglobinopatias, Universidade de Ciências Médicas Ahwaz Jondishapour, Hospital Shafa e Departamento de Hematologia. ** Centro de Pesquisa de Fisiologia, Universidade de Ciências Médicas Ahwaz Jondishapour. *** Faculdade de Medicina, Universidade de Ciências Médicas Ahwaz Jondishapour.
Endereço para correspondência :
Fakher Rahim, Centro de Pesquisas em Fisiologia, Universidade de Ciências Médicas Ahwaz Jondishapur, Ahwaz, Irã. fakherraheem@yahoo.comE-Mail: Tel: +986113362411Abstrato
Antecedentes e Objectivos: Em regiões prevalentes, as talassaemias coexistem frequentemente com uma variedade de variantes estruturais da Hb, dando origem a genótipos complexos e a um espectro extremamente amplo de fenótipos clínicos e hematológicos. As investigações hematológicas e bioquímicas e os estudos familiares fornecem pistas essenciais para as diferentes interações e são fundamentais para o diagnóstico de DNA dos distúrbios da Hb.Material e métodos:Uma cuidadosa abordagem de três níveis envolvendo: (1) hemograma completo (2) Testes hematológicos especiais, seguidos por (3) análise de mutação do DNA, fornece a maneira mais eficaz de mutações genéticas primárias, bem como interações gene-gene que podem influenciar a fenótipo geral pode ser detectado. No Irã, existem muitas formas diferentes de talassemias α e β. Cada vez mais, diferentes Variantes de Hb estão sendo detectadas, e seus efeitos per se, ou em combinação com as talassemias, fornecem desafios diagnósticos adicionais.
Resultado:Fizemos um trabalho de diagnóstico passo a passo em 800 pacientes de hemoglobinopatias que foram encaminhados ao Centro de Pesquisa de Talassemia e Hemoglobinopatias no Hospital Shafa da Universidade Ahwaz Joundishapour de Ciências Médicas, respectivamente. Detectamos 173 pacientes como Anemia por Deficiência de Ferro e 627 indivíduos como pacientes talassêmicos por meio de diferentes índices. Detectamos 75% (472/627) das mutações da β-talassemia usando a técnica do sistema de mutação refratária por amplificação (ARMS) e 19% (130/627) das mutações da α-talassemia usando a técnica de Gap-PCR e 6% (25 / 627) como variantes de Hb pela técnica de eletroforese de Hb com sucesso.
Conclusão:Quase todas as hemoglobinopatias podem ser detectadas com os ensaios atuais baseados em PCR, com exceção de algumas poucas deleções raras. É necessário o conhecimento dos números dos genes α e ß nos traços talassêmicos α e β de qualquer população, pois modifica o fenótipo da talassemia alterando a razão de α e ß-cadeias de hemoglobina.
Palavras-chave
α e β-talassemia, variantes da Hemoglobina, Anemia por Deficiência de Ferro (IDA), reação em cadeia da Polimerase de Gap (Gap-PCR).
Como citar este artigo:
RAHIM F, AHADI R. THALASSEMIA E TRANSTORNOS HEMOGLOBIN NA PROVÍNCIA DE KHUZESTAN DO IRÃ. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 junho [citado: 2018 29 de agosto]; 2: 820-826. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=June&volume=2&issue=3&page=820-826&id=257
Introdução Ashemoglobinopatias são doenças hereditárias da globina, que é o componente proteico da hemoglobina (Hb). As hemoglobinopatias são o defeito genético mais comum em todo o mundo, com uma estimativa de 269 milhões de portadores (1) . O Irã, um país de 1.648.000 km2 de largura, como muitos outros países da região, tem um grande número de pacientes com talassemia (2) . As talassemias são as doenças monogênicas mais comuns no mundo. Mutações em genes que codificam as proteínas globinas que alteram a produção proteica produzem as síndromes da talassemia. Mutações nos genes da globina que levam a proteínas anormais são chamadas variantes de Hbs (3). Mais de 23 defeitos moleculares diferentes foram identificados para α-talassemia até a data. No caso da ß-talassemia, a presença de mais de 150 mutações conhecidas é ainda mais desconcertante (4). Talassemia é encontrada em cerca de 60 países com a maior prevalência na região do Mediterrâneo, partes do norte e oeste da África, o Oriente Médio, o subcontinente indiano, extremo sul e sudeste da Ásia, compondo juntos o chamado cinturão de talassemia. Nos países ocidentais, a talassemia afeta principalmente indivíduos cujos ancestrais são rastreáveis a áreas de alta prevalência [5-8]. Cada população em risco, no entanto, tem seu próprio espectro de mutações comuns, geralmente de cinco a dez; uma descoberta que simplifica a análise de mutação e, assim, determina a origem dos genes mutantes. Para o propósito deste estudo, estudamos a mutação dos importantes genes da globina em humanos, isto é, os genes da globina 2 β e os genes da globina 4 α.
Material e métodos
Coleta de amostras: Amostras de sangue de 2mL cada foram coletadas em frascos de EDTA e em frascos simples de 800 pacientes (4ml por paciente) encaminhados ao Centro de Pesquisa de Talassemia e Hemoglobinopatias (RCTH), que é o único centro trabalhando em hematologia e oncologia na Southwest. Khuzistão) do Irã. O período de tempo do estudo foi de fevereiro de 2005 a agosto de 2007.Contagem sangüínea completa:Em todos esses pacientes, os níveis de ferritina sérica (e, se necessário, ferro sérico, capacidade de ligação de ferro e saturação percentual) foram procurados. Isto é recomendado porque às vezes, particularmente durante a gravidez, é possível que os estoques de ferro sejam baixos ou, na presença de deficiência de ferro, é possível que o MCV ou MCH sejam influenciados pela deficiência de ferro. Também é ocasionalmente visto que o nível de HbA2 pode ser falsamente reduzido pela deficiência de ferro. Tentamos diferenciar β-talassemia de anemia por deficiência de ferro com a ajuda de índices discriminados incluem índice de Mentzer (9) , Inglaterra e Fraser Index (10) , Srivastava Index (11) , Green e King Index (12) , Shine e Lal Index (13), contagem de glóbulos vermelhos (RBC), índice de largura de distribuição de glóbulos vermelhos (RDWI) (14) , densidade média de hemoglobina por litro de sangue (MDHL) e densidade média de hemoglobina celular (MCHD) (15) . Se houver deficiência de ferro, é essencial corrigir isso e repetir o hemograma completo e todas as outras investigações. . Detectamos 173 pacientes como AID e o restante como transtornos da talassemia.
Testes Hematológicos Especiais:Rastreamos todos os pacientes pelos testes acima mencionados e comparamos todos os dados para classificá-los. É apropriado ordenar todos os testes simultaneamente, uma vez que eles levam tempo para serem executados, e muitas vezes a informação pode ser obtida a partir de testes que podem não ter sido considerados relevantes, quando se inicia a investigação de uma hemoglobinopatia. Alguns dos testes são tecnicamente exigentes e, portanto, a pessoa que solicita os testes deve ter algum conhecimento das habilidades técnicas do laboratório, bem como experiência na interpretação dos resultados. Outros testes hematológicos especiais realizados, particularmente quando se investigou a variante mais incomum de Hbs, foram testes de afinidade ao oxigênio, estabilidade da hemoglobina e detecção de metahemoglobina. A espectrometria de massa tem sido utilizada para caracterizar várias variantes de Hbs (17). A última abordagem pode ser muito valiosa para a triagem populacional, mas não para a detecção envolvendo casos individuais; as abordagens baseadas em DNA continuam sendo os métodos de escolha. Comparamos os valores das variantes HbA, HbA2, HbF e Hb para confirmar nosso achado, respectivamente. Descobrimos que todos os 627 pacientes (130 pacientes com suspeita de α-talassemia e 472 pacientes com suspeita de β-talassemia) apresentavam talassemia. Também foram detectados 23 indivíduos portadores de HbS, HbDpanjub e dois casos suspeitos de Hb Lepore (Tabela / Fig. 1).. Posteriormente, todo o gene da β-globina foi sequenciado usando análise de mutação direta por sequenciamento de bases nucleotídicas para confirmar o status de Hb Lepore. Finalmente, descobrimos que, em ambos os casos, as presenças de Hb Lepore foram descartadas. Também comparamos os valores das variantes HbA, HbA2, HbF e Hb para confirmar nosso achado, respectivamente.
Fontes de preparação de DNA e DNA: A principal fonte de DNA são leucócitos periféricos obtidos a partir de sangue periférico anticoagulado, preferencialmente com ácido etilenodiaminotetracético (EDTA). O DNA fetal é principalmente isolado de vilosidades coriônicas obtidas por meio de aspiração transcervativa guiada por ultrassom ou aspiração transabdominal guiada por ultrassonografia. O DNA fetal também pode ser preparado a partir de células do líquido amniótico diretamente ou após a cultura. É prudente reservar alguns mililitros para cultur
Resultados
Fizemos uma pesquisa de diagnóstico passo a passo em 800 pacientes com hemoglobinopatias que foram encaminhados ao Centro de Pesquisa de Talassemia e Hemoglobinopatias no Hospital Shafa da Universidade Ahwaz Joundishapour de ciências médicas, respectivamente. Detectamos 173 pacientes como AID e o restante como hemoglobinopatias com o auxílio das técnicas acima. Também descobrimos que todos os 627 pacientes (130 pacientes com suspeita de α-talassemia e 472 pacientes com suspeita de β-talassemia) apresentavam talassemia. Entre os demais 25 casos, foram detectados 23 indivíduos, que apresentavam HbS, HbDpunjab, e em repouso, dois casos com suspeita de Hb Lepore (Tabela / Fig. 1).. Posteriormente, todo o gene da β-globina foi sequenciado usando análise de mutação direta por sequenciamento de bases nucleotídicas para confirmar o status de Hb Lepore. Finalmente, descobrimos que a presença de Hb Lepore para ambos os casos foi descartada. A mutação β-talassêmica mais predominante que encontramos foi IVS II - 1 (G → C) (20%) seguida por outras muitas mutações conhecidas menos freqüentes na parte sul do Irã listadas na (Tabela / Fig. 2). Havia 130 pacientes com suspeita de α-talassemia baseada em testes hematológicos em nosso estudo. Assim, para confirmar que analisamos a deleção do gene da α-globina pela técnica de Gap-PCR e encontramos 6 tipos de mutações em 98 indivíduos de 130. O mais predominante foi - α 3,7 (62%) seguido por - - MED, - α 5NT, - - MEDII, - α4.2, - α PA, e - - MED / - α 3.7 (HbH) para parte do sul do Irã listados na (Tabela / Fig 3). Detectamos que 6 indivíduos com três deles apresentaram valores inferiores a 1,0 e, através de investigações posteriores utilizando técnicas de análise molecular, os confirmaram como casos de β - talassemia afetada com padrões heterozigotos. Três dos seis casos apresentaram valores superiores a 1,0 e foram considerados casos de talassemia-α que, com a ajuda de novas investigações usando técnicas de análise molecular, foram confirmados como casos de α-talassemia afetada com padrões heterozigotos (Tabela / Fig. 4) .Discussão
Entre todas as hemoglobinopatias, as talassemias alfa e beta são as mais comuns. Quase todas as hemoglobinopatias podem ser detectadas com os ensaios atuais baseados em PCR, com exceção de algumas poucas deleções raras. O complexo espectro mutacional das hemoglobinopatias, especialmente relevante em uma comunidade multiétnica, requer um método com a capacidade de varrer os genes da globina β (e / ou α) rápida e precisamente para todas as mutações. O tipo mais comum de betahalasemia visto no Irã é - eliminação de α 3,7. Hadavi et al (22)relatou a prevalência de –α3.7 de rejeição na população do Irã como 30.2% .Nossos dados mostraram a prevalência de α – 3,7 de exclusão em 20% na população da região sudoeste (Khuzestan) no Irã. Em nosso estudo, encontramos apenas dois casos de deleção - α4.2 e poucos casos de quaisquer outras deleções relatadas até o momento. Hadavi et al., (22) relataram - deleção α4,2 em indivíduos iranianos com uma prevalência de 3,5%. Najmabadi et al., (23) , (24)relataram a prevalência da mutação β-talassemia IVS-II-I (G -> A) de 34% na população da região sudoeste do Irã. Em nosso estudo, descobrimos que as mutações mais freqüentes foram CD 36/37, IVS II-I e IVS I-110, seguidas de outros casos de quaisquer outras mutações relatadas até o momento. Nosso estudo mostrou que as mutações mais freqüentes foram a deleção de um único gene (- α 3.7) em indivíduos iranianos que também é coerente com outros estudos. É necessário o conhecimento do número de genes α e ß em características de talassemia α e β em qualquer população, pois modifica o fenótipo da talassemia alterando a razão de α e ß-cadeias de hemoglobina.Conclusão
A compactação dos genes da globina significa que a detecção de hemoglobinopatia é, em grande parte, uma abordagem baseada em PCR que pode utilizar a análise de sequenciamento direto. Quase todas as hemoglobinopatias podem ser detectadas com os ensaios atuais baseados em PCR, com exceção de algumas poucas deleções raras. No entanto, o serviço de diagnóstico molecular ainda está em desenvolvimento para tentar atender às demandas da população que atende. Uma abordagem de alto rendimento será necessária para atender as pressões da prática e as crescentes necessidades estabelecidas pelo programa de rastreamento pré-natal. Essa carga de trabalho crescente determina a automação crescente, o que pode exigir o uso de plataformas robóticas automatizadas para preparar amostras e reações e o uso de plataformas automatizadas para realizar a detecção real. Na maioria das populações, as β-talassemia (e hemoglobinopatias relacionadas) são clinicamente mais relevantes do que as α-talassaemias. O complexo espectro mutacional das hemoglobinopatias, especialmente relevante em uma comunidade multiétnica, requer um método com a capacidade de varrer os genes da globina β (e / ou α) de forma rápida e precisa para todas as mutações. Esse aspecto está sendo tratado pelo desenvolvimento de matrizes. Embora em sua infância, os arrays são muito promissores e são passíveis de ampliação e automação. A curto prazo, a geração atual de instrumentos, como os sistemas de eletroforese capilar, simplificou muito a análise da sequência de DNA. O sistema de electroforese capilar também se presta à metodologia de mini-sequenciação multiplexada que é altamente adequada para o rastreio das mutações do gene da globina comum.Reconhecimento
Este trabalho foi apoiado pelo diretor do hospital de Shafa e departamento de hematologia e oncologia. O autor também quer agradecer aos pacientes e suas famílias.Os serviços de pesquisa do JCDR foram utilizados na reformulação do manuscrito.
Referências
1.Rund D, Rachmilewitz E. Beta-Thalassaemia. N Engl J Med. 2005; 353:1135–46.
2.Haghshenas M, Zamani J. [Talassemia]. 1ª ed. Shiraz: Centro de Publicações da Universidade de Ciências Médicas de Shiraz, 1997. [Livro em Persa]3.Angastiniotis M, Modell B. Epidemiologia global de desordens de hemoglobina. Ann NY Acad Sci. 1998; 850: 251-69.4.Cao A, Saba L., Galanello R, Rosatelli MC. Diagnóstico molecular e rastreio de portadores para beta talassemia. JAMA 1997 15 de outubro; 278 (15): 1273-7.5.Lorey FW, Arnopp J, Cunningham GC. Distribuição das variantes de hemoglobinopatia por etnia em um estado multiétnico. Genet Epidemiol 1996; 13 (5): 501-12.6.Birgens HS, Karle H., Guldberg P, Guttler F. [Hemoglobinopatia no município de Copenhague]. Ugeskr Laeger 1997 16 de junho; 159 (25): 3934-9. [Artigo em dinamarquês]7.Vetter B, Schwarz C, Kohne E, Kulozik AE. Beta-talassemia nas populações alemãs imigrantes e não imigrantes. Br J Haematol 1997 maio; 97 (2): 266-72.8.Rengelink-van der Lee, JH, Schulpen TW, Beemer FA. Incidência e prevalência de hemoglobinopatias em crianças na Holanda. Ned Tijdschr Geneeskd, 1995, 22 de julho; 139 (29): 1498-501. [Artigo em dinamarquês]9.Mentzer WC. Diferenciação da deficiência de ferro do traço talassêmico. Lancet 1973; 1: 882.10.Inglaterra JM, Fraser PM. Diferenciação da deficiência de ferro do traço talassêmico pelo hemograma rotineiro. Lancet 1973; 1: 449-52.11.Srivastava PC, Bevington JM. Deficiência de ferro e / ou talassemia. Lancet 1973; 1: 832.12.Green R, King R. Um novo discriminante de glóbulos vermelhos que incorpora a dispersão de volume para diferenciar a anemia ferropriva de talassemia menor. Células Sanguíneas 1989; 15: 481-95.13.Shine I, Lal S. Uma estratégia para detectar beta-talassemia menor. Lancet 1977; 1: 692-4.
Endereço para correspondência :
Fakher Rahim, Centro de Pesquisas em Fisiologia, Universidade de Ciências Médicas Ahwaz Jondishapur, Ahwaz, Irã. fakherraheem@yahoo.comE-Mail: Tel: +986113362411Abstrato
Antecedentes e Objectivos: Em regiões prevalentes, as talassaemias coexistem frequentemente com uma variedade de variantes estruturais da Hb, dando origem a genótipos complexos e a um espectro extremamente amplo de fenótipos clínicos e hematológicos. As investigações hematológicas e bioquímicas e os estudos familiares fornecem pistas essenciais para as diferentes interações e são fundamentais para o diagnóstico de DNA dos distúrbios da Hb.Material e métodos:Uma cuidadosa abordagem de três níveis envolvendo: (1) hemograma completo (2) Testes hematológicos especiais, seguidos por (3) análise de mutação do DNA, fornece a maneira mais eficaz de mutações genéticas primárias, bem como interações gene-gene que podem influenciar a fenótipo geral pode ser detectado. No Irã, existem muitas formas diferentes de talassemias α e β. Cada vez mais, diferentes Variantes de Hb estão sendo detectadas, e seus efeitos per se, ou em combinação com as talassemias, fornecem desafios diagnósticos adicionais.Resultado:Fizemos um trabalho de diagnóstico passo a passo em 800 pacientes de hemoglobinopatias que foram encaminhados ao Centro de Pesquisa de Talassemia e Hemoglobinopatias no Hospital Shafa da Universidade Ahwaz Joundishapour de Ciências Médicas, respectivamente. Detectamos 173 pacientes como Anemia por Deficiência de Ferro e 627 indivíduos como pacientes talassêmicos por meio de diferentes índices. Detectamos 75% (472/627) das mutações da β-talassemia usando a técnica do sistema de mutação refratária por amplificação (ARMS) e 19% (130/627) das mutações da α-talassemia usando a técnica de Gap-PCR e 6% (25 / 627) como variantes de Hb pela técnica de eletroforese de Hb com sucesso.
Conclusão:Quase todas as hemoglobinopatias podem ser detectadas com os ensaios atuais baseados em PCR, com exceção de algumas poucas deleções raras. É necessário o conhecimento dos números dos genes α e ß nos traços talassêmicos α e β de qualquer população, pois modifica o fenótipo da talassemia alterando a razão de α e ß-cadeias de hemoglobina.
Palavras-chave
α e β-talassemia, variantes da Hemoglobina, Anemia por Deficiência de Ferro (IDA), reação em cadeia da Polimerase de Gap (Gap-PCR).
Como citar este artigo:
RAHIM F, AHADI R. THALASSEMIA E TRANSTORNOS HEMOGLOBIN NA PROVÍNCIA DE KHUZESTAN DO IRÃ. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 junho [citado: 2018 29 de agosto]; 2: 820-826. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=June&volume=2&issue=3&page=820-826&id=257
Introdução Ashemoglobinopatias são doenças hereditárias da globina, que é o componente proteico da hemoglobina (Hb). As hemoglobinopatias são o defeito genético mais comum em todo o mundo, com uma estimativa de 269 milhões de portadores (1) . O Irã, um país de 1.648.000 km2 de largura, como muitos outros países da região, tem um grande número de pacientes com talassemia (2) . As talassemias são as doenças monogênicas mais comuns no mundo. Mutações em genes que codificam as proteínas globinas que alteram a produção proteica produzem as síndromes da talassemia. Mutações nos genes da globina que levam a proteínas anormais são chamadas variantes de Hbs (3). Mais de 23 defeitos moleculares diferentes foram identificados para α-talassemia até a data. No caso da ß-talassemia, a presença de mais de 150 mutações conhecidas é ainda mais desconcertante (4). Talassemia é encontrada em cerca de 60 países com a maior prevalência na região do Mediterrâneo, partes do norte e oeste da África, o Oriente Médio, o subcontinente indiano, extremo sul e sudeste da Ásia, compondo juntos o chamado cinturão de talassemia. Nos países ocidentais, a talassemia afeta principalmente indivíduos cujos ancestrais são rastreáveis a áreas de alta prevalência [5-8]. Cada população em risco, no entanto, tem seu próprio espectro de mutações comuns, geralmente de cinco a dez; uma descoberta que simplifica a análise de mutação e, assim, determina a origem dos genes mutantes. Para o propósito deste estudo, estudamos a mutação dos importantes genes da globina em humanos, isto é, os genes da globina 2 β e os genes da globina 4 α.Material e métodos
Coleta de amostras: Amostras de sangue de 2mL cada foram coletadas em frascos de EDTA e em frascos simples de 800 pacientes (4ml por paciente) encaminhados ao Centro de Pesquisa de Talassemia e Hemoglobinopatias (RCTH), que é o único centro trabalhando em hematologia e oncologia na Southwest. Khuzistão) do Irã. O período de tempo do estudo foi de fevereiro de 2005 a agosto de 2007.Contagem sangüínea completa:Em todos esses pacientes, os níveis de ferritina sérica (e, se necessário, ferro sérico, capacidade de ligação de ferro e saturação percentual) foram procurados. Isto é recomendado porque às vezes, particularmente durante a gravidez, é possível que os estoques de ferro sejam baixos ou, na presença de deficiência de ferro, é possível que o MCV ou MCH sejam influenciados pela deficiência de ferro. Também é ocasionalmente visto que o nível de HbA2 pode ser falsamente reduzido pela deficiência de ferro. Tentamos diferenciar β-talassemia de anemia por deficiência de ferro com a ajuda de índices discriminados incluem índice de Mentzer (9) , Inglaterra e Fraser Index (10) , Srivastava Index (11) , Green e King Index (12) , Shine e Lal Index (13), contagem de glóbulos vermelhos (RBC), índice de largura de distribuição de glóbulos vermelhos (RDWI) (14) , densidade média de hemoglobina por litro de sangue (MDHL) e densidade média de hemoglobina celular (MCHD) (15) . Se houver deficiência de ferro, é essencial corrigir isso e repetir o hemograma completo e todas as outras investigações. . Detectamos 173 pacientes como AID e o restante como transtornos da talassemia.Testes Hematológicos Especiais:Rastreamos todos os pacientes pelos testes acima mencionados e comparamos todos os dados para classificá-los. É apropriado ordenar todos os testes simultaneamente, uma vez que eles levam tempo para serem executados, e muitas vezes a informação pode ser obtida a partir de testes que podem não ter sido considerados relevantes, quando se inicia a investigação de uma hemoglobinopatia. Alguns dos testes são tecnicamente exigentes e, portanto, a pessoa que solicita os testes deve ter algum conhecimento das habilidades técnicas do laboratório, bem como experiência na interpretação dos resultados. Outros testes hematológicos especiais realizados, particularmente quando se investigou a variante mais incomum de Hbs, foram testes de afinidade ao oxigênio, estabilidade da hemoglobina e detecção de metahemoglobina. A espectrometria de massa tem sido utilizada para caracterizar várias variantes de Hbs (17). A última abordagem pode ser muito valiosa para a triagem populacional, mas não para a detecção envolvendo casos individuais; as abordagens baseadas em DNA continuam sendo os métodos de escolha. Comparamos os valores das variantes HbA, HbA2, HbF e Hb para confirmar nosso achado, respectivamente. Descobrimos que todos os 627 pacientes (130 pacientes com suspeita de α-talassemia e 472 pacientes com suspeita de β-talassemia) apresentavam talassemia. Também foram detectados 23 indivíduos portadores de HbS, HbDpanjub e dois casos suspeitos de Hb Lepore (Tabela / Fig. 1).. Posteriormente, todo o gene da β-globina foi sequenciado usando análise de mutação direta por sequenciamento de bases nucleotídicas para confirmar o status de Hb Lepore. Finalmente, descobrimos que, em ambos os casos, as presenças de Hb Lepore foram descartadas. Também comparamos os valores das variantes HbA, HbA2, HbF e Hb para confirmar nosso achado, respectivamente.
Fontes de preparação de DNA e DNA: A principal fonte de DNA são leucócitos periféricos obtidos a partir de sangue periférico anticoagulado, preferencialmente com ácido etilenodiaminotetracético (EDTA). O DNA fetal é principalmente isolado de vilosidades coriônicas obtidas por meio de aspiração transcervativa guiada por ultrassom ou aspiração transabdominal guiada por ultrassonografia. O DNA fetal também pode ser preparado a partir de células do líquido amniótico diretamente ou após a cultura. É prudente reservar alguns mililitros para cultur
Resultados
Fizemos uma pesquisa de diagnóstico passo a passo em 800 pacientes com hemoglobinopatias que foram encaminhados ao Centro de Pesquisa de Talassemia e Hemoglobinopatias no Hospital Shafa da Universidade Ahwaz Joundishapour de ciências médicas, respectivamente. Detectamos 173 pacientes como AID e o restante como hemoglobinopatias com o auxílio das técnicas acima. Também descobrimos que todos os 627 pacientes (130 pacientes com suspeita de α-talassemia e 472 pacientes com suspeita de β-talassemia) apresentavam talassemia. Entre os demais 25 casos, foram detectados 23 indivíduos, que apresentavam HbS, HbDpunjab, e em repouso, dois casos com suspeita de Hb Lepore (Tabela / Fig. 1).. Posteriormente, todo o gene da β-globina foi sequenciado usando análise de mutação direta por sequenciamento de bases nucleotídicas para confirmar o status de Hb Lepore. Finalmente, descobrimos que a presença de Hb Lepore para ambos os casos foi descartada. A mutação β-talassêmica mais predominante que encontramos foi IVS II - 1 (G → C) (20%) seguida por outras muitas mutações conhecidas menos freqüentes na parte sul do Irã listadas na (Tabela / Fig. 2). Havia 130 pacientes com suspeita de α-talassemia baseada em testes hematológicos em nosso estudo. Assim, para confirmar que analisamos a deleção do gene da α-globina pela técnica de Gap-PCR e encontramos 6 tipos de mutações em 98 indivíduos de 130. O mais predominante foi - α 3,7 (62%) seguido por - - MED, - α 5NT, - - MEDII, - α4.2, - α PA, e - - MED / - α 3.7 (HbH) para parte do sul do Irã listados na (Tabela / Fig 3). Detectamos que 6 indivíduos com três deles apresentaram valores inferiores a 1,0 e, através de investigações posteriores utilizando técnicas de análise molecular, os confirmaram como casos de β - talassemia afetada com padrões heterozigotos. Três dos seis casos apresentaram valores superiores a 1,0 e foram considerados casos de talassemia-α que, com a ajuda de novas investigações usando técnicas de análise molecular, foram confirmados como casos de α-talassemia afetada com padrões heterozigotos (Tabela / Fig. 4) .DiscussãoEntre todas as hemoglobinopatias, as talassemias alfa e beta são as mais comuns. Quase todas as hemoglobinopatias podem ser detectadas com os ensaios atuais baseados em PCR, com exceção de algumas poucas deleções raras. O complexo espectro mutacional das hemoglobinopatias, especialmente relevante em uma comunidade multiétnica, requer um método com a capacidade de varrer os genes da globina β (e / ou α) rápida e precisamente para todas as mutações. O tipo mais comum de betahalasemia visto no Irã é - eliminação de α 3,7. Hadavi et al (22)relatou a prevalência de –α3.7 de rejeição na população do Irã como 30.2% .Nossos dados mostraram a prevalência de α – 3,7 de exclusão em 20% na população da região sudoeste (Khuzestan) no Irã. Em nosso estudo, encontramos apenas dois casos de deleção - α4.2 e poucos casos de quaisquer outras deleções relatadas até o momento. Hadavi et al., (22) relataram - deleção α4,2 em indivíduos iranianos com uma prevalência de 3,5%. Najmabadi et al., (23) , (24)relataram a prevalência da mutação β-talassemia IVS-II-I (G -> A) de 34% na população da região sudoeste do Irã. Em nosso estudo, descobrimos que as mutações mais freqüentes foram CD 36/37, IVS II-I e IVS I-110, seguidas de outros casos de quaisquer outras mutações relatadas até o momento. Nosso estudo mostrou que as mutações mais freqüentes foram a deleção de um único gene (- α 3.7) em indivíduos iranianos que também é coerente com outros estudos. É necessário o conhecimento do número de genes α e ß em características de talassemia α e β em qualquer população, pois modifica o fenótipo da talassemia alterando a razão de α e ß-cadeias de hemoglobina.ConclusãoA compactação dos genes da globina significa que a detecção de hemoglobinopatia é, em grande parte, uma abordagem baseada em PCR que pode utilizar a análise de sequenciamento direto. Quase todas as hemoglobinopatias podem ser detectadas com os ensaios atuais baseados em PCR, com exceção de algumas poucas deleções raras. No entanto, o serviço de diagnóstico molecular ainda está em desenvolvimento para tentar atender às demandas da população que atende. Uma abordagem de alto rendimento será necessária para atender as pressões da prática e as crescentes necessidades estabelecidas pelo programa de rastreamento pré-natal. Essa carga de trabalho crescente determina a automação crescente, o que pode exigir o uso de plataformas robóticas automatizadas para preparar amostras e reações e o uso de plataformas automatizadas para realizar a detecção real. Na maioria das populações, as β-talassemia (e hemoglobinopatias relacionadas) são clinicamente mais relevantes do que as α-talassaemias. O complexo espectro mutacional das hemoglobinopatias, especialmente relevante em uma comunidade multiétnica, requer um método com a capacidade de varrer os genes da globina β (e / ou α) de forma rápida e precisa para todas as mutações. Esse aspecto está sendo tratado pelo desenvolvimento de matrizes. Embora em sua infância, os arrays são muito promissores e são passíveis de ampliação e automação. A curto prazo, a geração atual de instrumentos, como os sistemas de eletroforese capilar, simplificou muito a análise da sequência de DNA. O sistema de electroforese capilar também se presta à metodologia de mini-sequenciação multiplexada que é altamente adequada para o rastreio das mutações do gene da globina comum.ReconhecimentoEste trabalho foi apoiado pelo diretor do hospital de Shafa e departamento de hematologia e oncologia. O autor também quer agradecer aos pacientes e suas famílias.Os serviços de pesquisa do JCDR foram utilizados na reformulação do manuscrito.Referências
1.Rund D, Rachmilewitz E. Beta-Thalassaemia. N Engl J Med. 2005; 353:1135–46.
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